[发明专利]氰脲酸半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种氰脲酸人工半抗原，其特征在于是将1，3，5-三嗪-2，4，6-(1H，3H，5H)-三酮与溴代羧酸苄酯反应制备得到，具有式(I)所示分子结构：

其中，n为-CH₂基团数目，n＝1～8。

2.一种权利要求1所述氰脲酸人工半抗原的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)将氰脲酸和溴代羧酸苄酯装入圆底烧瓶中，加入少量N，N-二甲基甲酰胺溶解反应物；

(2)往步骤(1)溶解好的体系中加入与氰脲酸等物质量的催化剂，反应后减压蒸除N，N-二甲基甲酰胺，用四氢呋喃溶解残渣A，过滤，滤液浓缩至干，得残渣B；

(3)残渣B用二氯甲烷+甲醇(95+5)为展开剂柱层析，获得中间产物，用过量氢氧化钾溶液充分水解中间产物，再用浓盐酸酸化，蒸干溶剂得白色固体，白色固体用冷水洗涤后得目标半抗原。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤(1)所述氰脲酸和溴代羧酸苄酯的投料摩尔比为6∶1～1∶1；步骤(1)所述溴代羧酸苄酯为n＝1～8的溴代羧酸苄酯。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤(2)所述催化剂为碳酸钾、三乙胺或4-二甲氨基吡啶。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤(2)所述反应的反应温度为40～80℃，反应时间为5～24h。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤(3)所述浓盐酸酸化是将中间产物酸化至pH值为3～6。

7.一种氰脲酸人工抗原，其特征在于是将权利要求1所述的氰脲酸半抗原与蛋白质偶联制备得到，具有式(II)所示分子结构：

其中，n为-CH₂基团数目，n＝1～8。

8.一种权利要求7所述氰脲酸人工抗原的制备方法，其特征在于采用活泼脂法或者混合酸酐法将权利要求1所述的氰脲酸半抗原与蛋白质偶联。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)将所述半抗原溶解于溶剂中，所述溶剂优选二氧六环或二甲基甲酰胺；

(2)往步骤(1)溶解好的体系中加入二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，室温反应后离心除去沉淀，得上清液；二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺加入量优选按照摩尔比1∶1的比例确定；

(3)将上清液滴入pH值为7.4～9.55的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液中，缓冲液中含有10mg/mL的载体蛋白，反应2～4h后，将反应液装入透析袋，用0.85％的生理盐水透析3～4天，得人工抗原；

或者包括以下步骤：

(1)将权利要求2或3制备得到的半抗原溶解于溶剂中；所述溶剂优选二氧六环或二甲基甲酰胺；

(2)往步骤(1)体系中加入氯甲酸异丁酯，4℃反应得甲液；

将载体蛋白溶于1mol/L pH值为9.6的碳酸氢钠缓冲液中，得乙液；载体蛋白优选BSA或KLH或CONA或THY或OVA；

(3)将甲液缓慢滴加到乙液中，4℃搅拌反应过夜，将反应液装入透析袋，用0.85％的生理盐水透析3d，得人工抗原。

10.一种权利要求7所述抗原的应用，其特征在于应用于制备特异性抗体或氰脲酸免疫检测方面。