[发明专利]氰脲酸半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于食品安全技术领域。具体涉及氰脲酸半抗原、人工抗原和抗体的制备方法及应用。

背景技术

氰脲酸又名1，3，5-三嗪-2，4，6-(1H，3H，5H)-三酮，S-三嗪-2，4，6-三醇，异氰脲酸，2，4，6-三(2-羟基-4-正丁氧基苯基)-1，3，5-三嗪，对称三羟基三氮杂苯，2，4，6-三羟基-1，3，5-三嗪，均三嗪三醇，2，4，6-三羟基-1，3，5-三嗪，CAS号：108-80-5，结构式为：

氰脲酸可以作为三聚氰胺的一种杂质出现；氰脲酸也是美国食品和药品管理局认可的可以用作反刍动物饲料添加剂的缩二脲的一种成分；它还被用作二氯异氰脲酸消毒剂的分解物，可在游泳池水中发现。消费者接触这一化学品的可能途径是：食用被非法添加三聚氰胺或者氰脲酸的食品、喝了游泳池的水、饮用由地表水处理后的饮水，以及食用体内积存此化学品的鱼类。对饮水消毒时，二氯异氰脲酸钠迅速脱氯，形成氰脲酸(有关文献命名为氰尿酸)。

氰脲酸对哺乳动物具有低急性毒性，大鼠的经口半数致死量为每公斤体重7700毫克。几项亚慢性经口毒性研究项目显示，氰脲酸造成肾组织损伤，其中包括肾小管扩张，肾小管上皮坏死或增生，嗜碱性肾小管增加，中性粒细胞浸润，以及矿化和纤维化。

对氰脲酸残留的检测目前主要采用高效液相色谱法(HPLC)。然而应用HPLC时样品前处理非常繁琐，测定方法相当复杂，需受过专门训练的人员才能操作，检测通量很小，而且监测成本昂贵。因此，目前我国相应的氰脲酸检测技术并不很完备，很有必要研制更加简单快捷方便的检测产品。

免疫检测方法，是目前食品安全快速检测的重要方法，检测成本很低，使用简单，非常适合大量样品的筛选检测，已经在食品安全监管中发挥了重要作用。

但任何半抗原物质免疫检测方法的建立，都必须首先制备出氰脲酸半抗原、抗原及抗体，然后才能利用这些试剂建立免疫检测方法。因此，半抗原合成、人工抗原及其抗体制备，是氰脲酸免疫分析方法建立的难点。半抗原物质的抗体生产涉及分析化学、有机化学、免疫学、生物学等知识背景，任何一个环节失败，皆不能成功。抗原设计的合理性确定了合成的难度，同时决定了抗体的特异性，目前尚没有成熟的理论完全预测。因此，尽管氰脲酸的快速检测有很大的需求，但由于半抗原物质抗体制备技术的复杂性合成的难度，国内外目前尚未见氰脲酸免疫分析的任何报导。

发明内容

本发明的一个目的是填补氰脲酸现有检测技术的不足，提供一种可应用于氰脲酸免疫检测方面的氰脲酸人工半抗原、人工抗原和特异性抗体。

本发明的另一个目的是提供所述氰脲酸人工半抗原、人工抗原和特异性抗体的制备方法。

本发明还有一个目的是提供所述氰脲酸人工半抗原、人工抗原和特异性抗体的应用。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现：

提供一种氰脲酸人工半抗原、人工抗原和特异性单克隆抗体，所述氰脲酸人工半抗原具有式(I)所示分子结构：

其中，n为-CH₂基团数目，n＝1～8。

所述氰脲酸人工抗原，具有式(II)所示分子结构：

其中，n为-CH₂基团数目，n＝1～8。

本发明提供了所述氰脲酸半抗原的制备方法，是将1，3，5-三嗪-2，4，6-(1H，3H，5H)-三酮与溴代羧酸苄酯反应生成含羧基的半抗原；

氰脲酸半抗原合成路线如下：

本发明所述氰脲酸半抗原的制备包括以下步骤：

(1)将氰脲酸和溴代羧酸苄酯装入圆底烧瓶中，加入少量N，N-二甲基甲酰胺(又名二甲基甲酰胺，DMF)溶解反应物；

(2)往步骤(1)溶解好的反应物中加入与氰脲酸等物质量的催化剂，反应后减压蒸除溶剂DMF，用四氢呋喃溶解残渣A，过滤，滤液浓缩至干，得残渣B；

(3)残渣B用二氯甲烷+甲醇(95+5)为展开剂柱层析，获得中间产物，用过量氢氧化钾溶液充分水解中间产物，再用浓盐酸酸化至pH值为3～6，蒸干溶剂得白色固体，白色固体用冷水洗涤后得目标半抗原。

上述步骤(1)所述氰脲酸和溴代羧酸苄酯的投料摩尔比为6∶1～1∶1。

步骤(1)所述溴代羧酸苄酯优选n＝1～8的溴代羧酸苄酯。

步骤(2)所述催化剂为碳酸钾、三乙胺或其他碱性催化剂如DMAP(4-二甲氨基吡啶)。

步骤(2)所述反应的反应温度为40～80℃，反应时间为5～24h。

步骤(3)所述冷水洗涤次数为3～5次。