[发明专利]碱性橙半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种碱性橙人工半抗原，其特征在于具有式(I)或式(II)所示结构：

其中，式(I)或式(II)中n＝0～3。

2.一种权利要求1所述碱性橙半抗原的制备方法，其特征在于是以间苯二胺与对氨基苯酸或间氨基苯酸通过重氮化反应生成含羧基的半抗原。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)将对氨基苯酸或间氨基苯酸1～3mmol溶于20ml水中，加入10ml 0.1mol/l的盐酸，加入含1.15～3.3mmol的亚硝酸钠水溶液1mL，反应2h，反应液为重氮液；

(2)将1～3倍于对氨基苯酸或间氨基苯酸物质的量的间苯二胺溶于5mL水中，用1mol/L盐酸调节pH值至6～7，然后逐滴加入步骤(1)制备得到的重氮液，静置过夜，离心所得沉淀即为半抗原。

4.一种碱性橙人工抗原，其特征在于具有式(III)或式(IV)所示结构：

其中，式(III)或式(IV)中n＝0～3。

5.一种权利要求4所述抗原的制备方法，其特征在于可用活泼脂法制备，步骤如下：

(1)将权利要求1所述的或权利要求2或3制备得到的半抗原5～10mg溶解于1～3ml二氧六环或二甲基甲酰胺中，加入5～10mg二环己基碳二亚胺和5～10mg N-羟基琥珀酰亚胺，反应3.5～5h，离心除去沉淀得上清；

(2)将上清滴入2mL pH值为7.4～9.6、1mol/L含有10mg/mL载体蛋白的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液中，反应8～12h，用0.85％的生理盐水透析4天得所述抗原。

6.一种权利要求4所述抗原的制备方法，其特征在于还可按照混合酸酐法制备，步骤如下：

(1)将权利要求1所述半抗原5～10mg溶解于1～3ml二氧六环或二甲基甲酰胺中，加入5～10mg加入氯甲酸异丁酯，搅拌反应0.5～2h，得甲液；

(2)将载体蛋白10～20mg溶于1～2mL 1mol/L、pH 9.6的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液中，得乙液；

(3)将甲液缓慢滴加到乙液中，搅拌反应过夜，反应液用0.85％的生理盐水透析4天得抗原。

7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于所述的载体蛋白为牛血清白蛋白、匙孔血蓝蛋白或卵清白蛋白。

8.一种权利要求4所述碱性橙抗原的应用，其特征在于是可应用制备碱性橙多克隆抗体或单克隆抗体。

9.根据权利要求8所述应用，其特征在于所述碱性橙抗原或碱性橙多克隆抗体或单克隆抗体应用于食品样品中的碱性橙残留检测方面。