[发明专利]恩诺沙星半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种恩诺沙星人工半抗原，其特征在于是以恩诺沙星与氨基丁酸或氨基己酸在NHS、DDC和DMF存在条件下反应制备得到，所述半抗原含4个或6个碳原子手臂，具有式(II)所示分子结构：

其中，n为-CH₂基团数目，n＝4或6。

2.根据权利要求1所述恩诺沙星人工半抗原，其特征在于n＝4。

3.一种权利要求1或2所述恩诺沙星人工半抗原的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)按投料摩尔比为1∶1∶1将恩诺沙星、N-羟基琥珀酰亚胺和脂溶性碳二亚胺置于反应容器中，并将上述混合物用少量的DMF溶解，室温下避光搅拌过夜；

(2)将经步骤(1)得到的反应物离心取上清得A液；

取与恩诺沙星等摩尔量的氨基丁酸或氨基己酸溶于少量蒸馏水中，得B液；

(3)将B液缓慢加到A液中，室温搅拌过夜，离心取上清液，调上清液为碱性，将析出的沉淀过滤，收集上清液；

(4)将步骤(3)制得的上清液调至酸性，收集沉淀，得到恩诺沙星半抗原。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于步骤(3)所述调上清液为碱性是将上清液pH值调节为8.0～8.5；步骤(4)所述调上清液为酸性是将上清液pH值调节为5.0～6.0；

5.一种恩诺沙星人工抗原，其特征在于是将权利要求1或2所述恩诺沙星半抗原与蛋白质偶联制备得到；具有式(III)所示分子结构：

其中，n为-CH₂基团数目，n＝4或6；优选n＝4。

6.一种权利要求4所述恩诺沙星人工抗原的制备方法，其特征在于是采用活泼脂法将所述恩诺沙星半抗原与蛋白质偶联。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)将等摩尔所述的恩诺沙星半抗原、DDC、NHS溶解于DMF中，室温避光反应过夜；

(2)将步骤(1)所得反应物离心取上清液，将上清液加入到含有载体蛋白的硼酸缓冲液中，混合物反应过夜；

(3)待步骤(2)反应完成后，将反应后混合液装入透析袋，透析得到所述人工抗原。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于步骤(2)所述载体蛋白为BSA或OVA，载体蛋白的浓度在20～30mg/mL；所述反应温度为4℃。

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于步骤(3)所述透析采用0.9％的生理盐水透析3天，每天更换透析液3～5次。

10.一种权利要求5所述抗原的应用，其特征在于应用于制备恩诺沙星抗体或环丙沙星免疫检测方面。