[发明专利]汞离子抗原及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种制备汞离子抗原的方法，包括如下步骤：

1)活化4-巯基苯基乙酸，得到活化的4-巯基苯基乙酸；

2)将步骤1)得到的活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白偶联，得到活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白的偶联物；

3)将步骤2)得到的所述活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白的偶联物与汞离子螯合，得到所述偶联物和汞离子的螯合物，即得到汞离子抗原。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

步骤1)活化4-巯基苯基乙酸的方法包括如下步骤：

A、将4-巯基苯基乙酸溶解于N，N′-二甲基甲酰胺中，得到I液；

B、二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺溶于N，N′-二甲基甲酰胺中，得到II液；

C、将I液和II液混合，搅拌反应，离心，收集上清液，即得到活化的4-巯基苯基乙酸；

步骤2)将步骤1)得到的活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白偶联的方法包括如下步骤：D、将步骤C得到的活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白溶液混合，反应；

步骤3)将步骤2)得到的所述活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白的偶联物与汞离子螯合的方法包括如下步骤：E、将所述活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白的偶联物与汞离子溶液混合，反应。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

步骤1)中，所述二环己基碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺与4-巯基苯基乙酸的投料摩尔比为不小于1∶1∶1，具体为2∶2∶1；

步骤2)中，所述活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白的投料摩尔比为15∶1；

步骤3)中，所述偶联物与汞离子的投料摩尔比为1∶5。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：

步骤1)中，所述步骤C中，搅拌反应的条件为：反应温度为25℃、反应时间为12小时、避光；所述离心转速为10000g，离心时间为10min；

步骤2)中，所述步骤D的反应条件为：反应温度为25℃，反应时间为12小时，反应的pH为9.5；

步骤3)中，所述步骤E的反应条件为：反应温度25℃，反应时间24小时。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：

所述步骤2)中，所述载体蛋白溶液为按如下方法制备：将载体蛋白溶解到缓冲液中得到载体蛋白溶液；所述缓冲液为碳酸盐、磷酸盐、硼酸盐或4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液，pH为9.6；所述载体蛋白为卵清白蛋白或牛血清白蛋白；

所述步骤3)中，所述汞离子溶液为氯化汞水溶液。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：

所述步骤2)的D中，在所述反应后，包括将反应产物进行透析的步骤；

所述步骤3)的E中，在所述反应后，包括将反应产物进行透析得到汞离子抗原的步骤。

7.由权利要求1-6中任一所述方法制备得到的汞离子抗原。

8.一种汞离子抗原，是活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白通过共价键连接形成的偶联物与汞离子通过配位键连接形成的络合物；所述共价键是活化的4-巯基苯基乙酸上的羧基与载体蛋白上的氨基形成的；所述配位键是偶联物中活化的4-巯基苯基乙酸上的巯基与汞离子形成的；所述活化的4-巯基苯基乙酸的化学结构式如下所示：

；所述载体蛋白为卵清白蛋白或牛血清白蛋白。

9.由权利要求7或8所述汞离子抗原得到的抗体。

10.权利要求7或8所述汞离子抗原和/或权利要求9中所述抗体在检测样品中汞离子中的应用；

权利要求7或8所述汞离子抗原和/或权利要求9中所述抗体在制备用于检测样品中汞离子的酶联免疫试剂盒中的应用；

权利要求7或8所述汞离子抗原和/或权利要求9中所述抗体在制备用于检测样品中汞离子的发光免疫试剂盒中的应用；

权利要求7或8所述汞离子抗原和/或权利要求9中所述抗体在制备用于检测样品中汞离子的免疫亲和色谱柱中的应用；

所述样品为水体、食品或土壤。