[发明专利]汞离子抗原及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种汞离子抗原及其制备方法与应用。

背景技术

汞是环境与农产品的一个重要污染物质，由于其能在人体和环境中长期蓄积，且可以通过食物链的富集作用传递给人或动物，给人类健康带来了严重的危害。如50年代中期在日本曾经因食用重金属汞污染的鱼而出现了震惊世界的水俣病，从而使环境中汞污染的健康危害问题得到了全世界的关注。环境中的汞的大量蓄积主要是因为工业三废的无序、超限排放，从而造成大量的土壤和水体污染，造成环境恶化。

重金属汞的分析方法有原子吸收光谱法、电感耦合等离子体发射光/质谱法、X-射线荧光光谱法及电位溶出分析法等。这几种仪器检测方法检测重金属汞不仅需要昂贵的仪器设备，而且检测费用高、检测时间长和检测步骤繁杂，不能用于现场的快速检测。免疫分析法是利用抗原与抗体的特异性结合反应而建立的一种分析方法，与仪器分析法相比，免疫分析法具有快速、便宜、简便、实时、易于进行现场检测、样品前处理简单、灵敏度高、选择性强、适合于高通量分析等优点。免疫检测试剂盒可以快速检测某一特定物质的含量，但要将免疫分析法应用到检测重金属离子汞，必须制备相应的抗原和抗体。目前，国内外文献报道的检测方法主要利用氨羧类螯合剂进行，螯合剂螯合重金属汞后制备重金属汞完全抗原，所制备的抗体只能识别重金属与螯合剂复合物，且需对样品进行复杂的前处理。

发明内容

本发明的一个目的是提供制备汞离子抗原的方法。

本发明所提供的方法，包括如下步骤：

1)活化4-巯基苯基乙酸，得到活化的4-巯基苯基乙酸；

2)将步骤1)得到的活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白偶联，得到活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白的偶联物；

3)将步骤2)得到的所述活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白的偶联物与汞离子螯合，得到所述偶联物和汞离子的螯合物，即得到汞离子抗原。

步骤1)活化4-巯基苯基乙酸的方法包括如下步骤：

A、将4-巯基苯基乙酸溶解于N，N′-二甲基甲酰胺中，得到I液；

B、将二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺溶于N，N′-二甲基甲酰胺中，得到II液，

C、将I液和II液混合，搅拌反应，离心，收集上清液，即得到活化的4-巯基苯基乙酸；

步骤2)将步骤1)得到的活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白偶联的方法包括如下步骤：D、将步骤C得到的活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白溶液混合，反应；

步骤3)将步骤2)得到的所述活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白的偶联物与汞离子螯合的方法包括如下步骤：E、将所述活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白的偶联物与汞离子溶液混合，反应。

步骤1)中，所述二环己基碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺与4-巯基苯基乙酸的投料摩尔比(此处摩尔比至少为1∶1∶1，要求4-巯基苯基乙酸彻底反应完毕，DCC与NHS的摩尔量不应小于4-巯基苯基乙酸的摩尔量，但是二环己基碳二亚胺与N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔量也不宜过多，过多易导致蛋白质自身偶联)为不小于1∶1∶1，具体为2∶2∶1；

步骤2)中，所述活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白的投料摩尔比为15∶1；

步骤3)中，所述偶联物与汞离子的投料摩尔比为1∶5。

步骤1)中，所述步骤C中，搅拌反应的条件为：反应温度为25℃、反应时间为12小时、避光；所述离心转速为10000g，离心时间为10min；

步骤2)中，所述步骤D的反应条件为：反应温度为25℃，反应时间为12小时，反应的pH为9.5；

步骤3)中，所述步骤E的反应条件为：反应温度25℃，反应时间24小时。

所述步骤2)中，所述载体蛋白溶液为按如下方法制备：将载体蛋白溶解到缓冲液中得到载体蛋白溶液；所述缓冲液为碳酸盐、磷酸盐、硼酸盐或4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液，pH为9.6；所述载体蛋白为卵清白蛋白或牛血清白蛋白；

所述步骤3)中，所述汞离子溶液为氯化汞水溶液。

所述步骤2)的D中，在所述反应后，包括将反应产物进行透析的步骤；所述透析液为浓度为0.1M、PH值为9.5的PBS缓冲液。

所述步骤3)的E中，在所述反应后，包括将反应产物进行透析得到汞离子抗原的步骤，所述透析液为浓度为0.1M、PH值为9.5的PBS缓冲液。

由上述任一所述方法制备得到的汞离子抗原也属于本发明的保护范围。

本发明的另一个目的是提供一种汞离子抗原。