[发明专利]一种检测羊多头蚴的酶联免疫试剂盒

权利要求书

1.一种检测羊多头蚴的酶联免疫试剂盒，包括试剂盒1内包被着包被原的诊断膜片1.1，酶标记物1.2，阴性对照血清1.3，阳性对照血清1.4，底物溶液1.5，洗涤液1.6，其特征是，所述包被原是羊多头蚴基因重组抗原蛋白，所述酶标记物1.2是酶标抗抗体。

2.根据权利要求1所述的检测羊多头蚴的酶联免疫试剂盒，其特征是所述的羊多头蚴基因重组抗原蛋白，其氨基酸序列为序列表SEQID NO：1所示序列。

3.根据权利要求1或2所述的检测羊多头蚴的酶联免疫试剂盒，其特征是所述的羊多头蚴基因重组抗原蛋白的核苷酸序列为表SEQID NO：2所示序列。

4.根据权利要求1或2所述的检测羊多头蚴的酶联免疫试剂盒，其特征是所述基因重组抗原蛋白的表达载体是pET-32a-Tm7重组表达质粒。

5.根据权利要求1所述的检测羊多头蚴的酶联免疫试剂盒，其特征是所述酶标抗抗体是羊脑多头蚴病阳性羊血清为一抗，辣根过氧化物酶偶联兔抗羊IgG为二抗。

6.根据权利要求1所述的检测羊多头蚴的酶联免疫试剂盒，其特征是所述诊断膜片1.1是包被有包被原的硝酸纤维素膜NC，阴性对照血清1.3是未患羊脑多头蚴病的阴性对照血清，阳性对照血清1.4是羊脑多头蚴病阳性对照血清，底物溶液1.5是DAB缓冲液，洗涤液1.6是洗涤缓冲液(pH7.4PBST)，以上属液体成分的均分装在小瓶中，并置于试剂盒1中。

7.根据权利要求1所述的羊多头蚴基因重组抗原蛋白的制备方法，其步骤如下：

(1)从羊脑内采到的多头蚴原头节为原料，提取总RNA，RT-PCR技术扩增出目的基因的全序列，命名为Tm7基因。

(2)PCR产物测序正确后，克隆出目的基因的开放阅读框ORF，将其连接到pMD 18-T载体，转化到大肠杆菌DH5α后测序，发现克隆到的目的基因的开放阅读框为207bp，编码68个氨基酸。

(3)将此片段亚克隆入pET-32a(+)载体，构建重组表达质粒pET-32a-Tm7，经转化大肠杆菌BL21(DE3)后IPTG诱导表达，用SDS-PAGE和Western-blot检测表达产物。

(4)将目的蛋白样品过Ni-Charged Resin柱纯化，收集洗脱峰蛋白液，进行电泳检测，获得纯度很高的目的蛋白即为基因重组抗原蛋白。