[发明专利]草鱼出血病疫苗蛋白表达载体及其构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种蛋白表达载体，尤其涉及一种用基因重组技术构建的疫苗蛋白表达载体及其构建方法。

背景技术

基于昆虫细胞的杆状病毒表达系统表达外源基因有很多优点：表达量高，可以表达高分子量的蛋白质，可以同时表达多个基因等等。然而昆虫细胞和哺乳动物细胞的蛋白合成后修饰加工存在差异，许多在昆虫细胞中表达的哺乳动物细胞蛋白质没有足够的活性(Kost TA，Condreay JP，Jarvis DL Baculovirus as versatile vectors for protein expression in insect and mammalian cells.Nature Biotechnology，2005，23：567-575)。自1995年起，重组杆状病毒被发现可以携带外源基因进入多种哺乳动物细胞(Sarkis C，Serguera C，Petres S，et al.Efficient transduction of neural cells in vitro and in vivo by a baculovirus-derived vector.Proceedings of the National Academy of Sciences USA，2000，97：14638-14643)。不管是体内还是体外，疱疹性口腔炎病毒糖蛋白(VSV G)被发现都可以增强杆状病毒转导外源基因在很多哺乳动物细胞中表达的水平(Mangor J.T.，Monsma S.A.，Johnson M.C.，Blissard G.W.，2001.A GP64-null baculovirus pseudotyped with vesicular stomatitis virus G protein.Journal of Virology，75：2544-2556；Tani H.，Limn C.K.，Yap C.C.，Onishi M.，Nozaki M.，Nishimune Y.，Okahashi N.，Kitagawa Y.，Watanabe R.，Mochizuki R.，Moriishi K.，Atsuura Y.，2003.In vitro and in vivo gene delivery by recombinant baculoviruses.Journal of Virology，77：9799-9808)。由于杆状病毒具有低毒性和在哺乳动物细胞中不复制的特点，携带VSV G的杆状病毒作为基因导入载体的研究已成为基因工程领域的一个研究热点。在已有的杆状病毒载体的研究工作中，外源基因都是被哺乳动物特异性的启动子介导表达的，目标蛋白质在繁殖病毒的昆虫细胞中并不表达(Aoki H，Sakoda Y，Jukuroki K，et al.Induction of antibodies in mice by a recombinant baculovirus expressing pseudorabies virus glycoprotein B in mammalian cells.Veterinary Microbiology，1999，68：197-207；Facciabene A，Aurisicchio L，Monica NL.Baculovirus vectors elicit antigen-specific immune responses in mice.Journal of Virology，2004，78：8663-8672)。选取一个能在无脊椎动物和脊椎动物细胞中都有活性的启动子构建重组杆状病毒，则会使在昆虫细胞中和哺乳动物细胞中同时表达与分析外源蛋白成为可能。已有的研究结果表明，对虾白斑病毒极早期基因ie1的启动子在无脊椎动物对虾和昆虫细胞中有表达活性(Liu W，Chang Y，Wang C，et al.Microarray and RT-PCR screening for white spot syndrome virus immediate-early genes in cycloheximi de-treated shrimp.Virology，2005，334：327-341；Lu L，Wang H，Manopo I，et al.Baculovirus-mediated promoter assay and transcriptional analysis of white spot syndrome virus orf427 gene.Virology Journal，2005，2(71))。