[发明专利]一种制备灰树花蛋白聚糖的方法

权利要求书

1.一种制备灰树花蛋白聚糖的方法，包括灰树花蛋白聚糖的提取、分离和纯化步骤，其特征在于：所述的灰树花蛋白聚糖的提取包括如下步骤：

(1)诱导自溶：调节菌体浓度为1-10％(w/v)，之后添加占总量0.01-0.5％(w/v)的无机盐；调节pH至4.5-6.0，在40-60℃条件下保温2-10h获得自溶溶液；

(2)酶解：将步骤(1)所得自溶溶液调节pH至7.0-8.5，添加0.01-0.1％(w/v)酶制剂，在40-60℃条件下保温2-8h；90℃灭酶活，冷却后离心，收集上清液即可获得灰树花蛋白聚糖的提取液。

2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于：所述的分离和纯化步骤为：

对步骤(2)所得的灰树花蛋白聚糖的提取液进行微滤，之后进行超滤脱盐和浓缩；超滤浓缩液经过层析纯化、冷冻干燥，即可得到灰树花蛋白聚糖。

3.根据权利要求1或2所述制备方法，其特征在于：步骤(1)中所采用的菌体是灰树花液体发酵菌丝体或灰树花鲜子实体或两者的混合物，采用灰树花鲜子实体时预先进行破碎，破碎至粒径0.1-1.0cm。

4.根据权利要求1或2所述制备方法，其特征在于：步骤(1)中所添加的无机盐为硫酸镁、氯化镁、硝酸镁、碳酸钙、氯化钙、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氯化钾中的一种或数种的混合物。

5.根据权利要求1或2所述制备方法，其特征在于：步骤(1)中采用酸调节pH，所采用的酸为柠檬酸、乙酸、盐酸、硫酸中的一种或数种的混合物。

6.根据权利要求1或2所述制备方法，其特征在于：步骤(2)中采用碱调节pH，所采用的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠中的一种或数种的混合物。

7.根据权利要求1或2所述制备方法，其特征在于：步骤(2)中而所采用的酶制剂中的酶选自纤维素酶、淀粉酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一种或数种的混合物。

8.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于：所述的微滤采用0.1-0.22μm的中空纤维膜组件完成；所述的超滤采用采用孔径为6000-50000Dalton的超滤膜组件完成，超滤的进程以超滤浓缩液的电导率达到100μs/cm以下时，或/和浓缩液中的蛋白聚糖浓度达1％时，终止超滤。

9.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于：所述层析采用离子交换层析，所用层析介质为DOWEX MXA-1或Q-Sepharose FF或DEAE-Sephacel或DEAE-Sepharose FF或717强碱性离子交换树脂或D201大孔强碱性阴离子交换树脂中的一种。