[发明专利]44个SNP位点多色荧光复合检测的方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及法医学个体识别，特别涉及SNP位点的基因分型，尤其是一种用于法医学个体识别的44个SNP位点多色荧光复合检测的方法及试剂盒。

背景技术

法医检案工作中，由于高温、潮湿、暴晒、微生物等因素的影响，生物性检材中的DNA分子经常被损坏，发生断裂，分子变小，大片段丢失，无法进行有效的STR分型，使案件侦破限于困境。目前，法医DNA分析中解决高度降解检材DNA样本分型的技术主要集中在两个方面：一种是miniSTR(小片段短串联重复)分析技术。这种技术是通过将STR(短串联重复)遗传标记的扩增引物设计的尽可能接近重复区域而缩短PCR产物片段长度，应用于高度降解检材和微量检材中可以提高DNA分型的成功率。但在分析高度降解检材方面，miniSTR基因座分析的DNA片段范围在80～150bp，对于＜100bp的高度降解DNA，miniSTR基因座分析技术仍然具有局限性。而且，由于扩增片段长度和荧光染料种类的限制，在一个复合扩增体系中只可以同时扩增较少的miniSTR基因座，一般为一种荧光物质标记一个基因座，一个扩增体系最多可同时复合4个miniSTR基因座，要想达到个体识别效能，就必须增加复合扩增系统的数量，至少需要3～4个复合扩增系统，因此，不适合微量检材的应用。另一种是SNPs分析技术，SNPs(单核苷酸多态性)是继限制性片段长度多态性(restriction fragmeng length polymorphism，RELP)和短串联重复序列(short tandem repeats，STRs)之后被发现的又一种人类遗传性标记，被称为第三代遗传标记，指人类基因组中特定部位的单个碱基序列的变异，其在人类基因组中分布极为广泛，大约每1000个碱基中就存在一个SNP，估计在人类基因组中大约有数百万个SNPs，数量超出STR基因座数目的几个数量级，而且，SNPs具有突变率低，扩增片段短，适合高通量检测和易于分型等特点，因此在法医学个体识别应用中具有广阔前景。选用可靠的多重分型方法，许多SNPs位点可以在短至45～55bp(变异位点两侧引物序列长度)的扩增片段内分型，因此，当DNA样本严重降解或遇到检材微量时，SNPs分析将更有价值。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种用于个体识别的44个SNP位点多色荧光复合检测的方法及试剂盒，使待测靶DNA的片段范围缩短至69～125bp，提高对高度降解DNA分型的成功率。

为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案是：用于个体识别的44个SNP位点多色荧光复合检测的试剂盒，其包括a)扩增体系：PCR缓冲溶液、MgCl₂、dNTPs、PCR引物、Taq DNA聚合酶、模板DNA，b)扩增产物纯化试剂：核酸外切酶Ⅰ(Exo I)及其缓冲溶液(Exo I Buffer)、虾碱性磷酸酶(SAP)及其缓冲溶液(SAP Buffer)，c)延伸反应试剂：延伸引物和SNaPshot反应混合液，d)测试试剂：Hi-Di甲酰胺和GeneScan^TM Size Standards-120LIZ，所述PCR引物和延伸引物由44个SNP基因位点的引物组成，所述44个SNP基因位点在NCBI中SNP数据库的rs号分别为rs1109037，rs3780962，rs987640，rs9951171，rs430046，rs338882，rs2342747，rs10092491，rs1821380，rs321198，rs7041158，rs13218440，rs560681，rs445251，rs8078417，rs10488710，rs7520386，rs214955，rs4530059，rs13182883，rs722290，rs6811238，rs279844，rs9905977，rs6955448，rs4288409，rs315791，rs740598，rs2272998，rs7205345，rs10773760，rs221956，rs576261，rs1498553，rs2399332，rs1058083，rs993934，rs1336071，rs1294331，rs1523537，rs2269355，rs12997453，rs1736442和rs10776839。