[发明专利]一种耐甲硫氨酸的除虫链霉菌菌种筛选方法

权利要求书

1.一种耐甲硫氨酸的除虫链霉菌菌种筛选方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)、取生长好的除虫链霉菌斜面一支，作为出发菌种，向内加入适量纯化水，将除虫链霉菌斜面上的孢子刮下得孢子液，将孢子液中的孢子链打碎、过滤得除虫链霉菌单孢子悬液一；

(2)、将除虫链霉菌单孢子悬液一置于紫外线灯下经照射进行诱变处理，然后接入含2-3％甲硫氨酸的液体培养基中，在温度27.5-28.5℃、湿度30-50％的条件下培养4-6天，富集耐受2-3％甲硫氨酸的菌株；

(3)、将耐受2-3％甲硫氨酸的菌株接入斜面培养基，在温度27.5-28.5℃、湿度30-50％的条件下培养7-9天，然后从斜面培养基中取一支成熟斜面，向内加入适量纯化水，轻轻将成熟斜面上的孢子刮下，然后将孢子链打碎后过滤得耐受2-3％甲硫氨酸的除虫链霉菌单孢子悬液二；吸取除虫链霉菌单孢子悬液二稀释成10^-4，10^-5，10^-6梯度浓度，然后分别吸取稀释后的10^-4，10^-5，10^-6梯度浓度的除虫链霉菌单孢子悬液二0.18-0.22ml分别涂在含2-3％甲硫氨酸的平板上，在含2-3％甲硫氨酸的平板培养基中，在温度27.5-28.5℃、湿度30-50％的条件下培养5-8天；

(4)、从涂过稀释过的除虫链霉菌单孢子悬液二的上述平板上中选取菌落密度适宜、菌落形态好的平板，从此平板上挑取单菌落接种至斜面培养基，在温度27.5-28.5℃、湿度30-50％的条件下培养7-9天，然后从培养好的斜面培养基上挖下0.8-0.12cm²的菌苔接入种子培养基，在温度27.5-28.5℃、湿度30-50％的条件下摇瓶培养24-28h后，按发酵体积的10％接种到发酵培养基中，在温度27.5-28.5℃、湿度30-50％的条件下摇瓶培养240-280h，然后测定效价，挑选出效价比出发菌种效价高的菌株；

(5)、将步骤4挑选的效价较高的菌株接种至斜面培养基在温度27.5-28.5℃、湿度30-50％的条件下培养7-9天，再从培养好的斜面培养基上挖下0.8-0.12cm²的菌苔接入种子培养基，在温度27.5-28.5℃、湿度30-50％的条件下摇瓶培养24-28h后，按发酵体积的10％接种到发酵培养基中，在温度27.5-28.5℃、湿度30-50％的条件下摇瓶培养240-280h，然后测定效价，挑选出效价比出发菌种效价高的菌株；

(6)、将步骤5挑选的效价较高的菌株进行遗传稳定性考察：即通过斜面培养基进行传代培养，在温度27.5-28.5℃、湿度30-50％的条件下培养7-9天，从得到的各子代斜面上挖下0.8-0.12cm²的菌苔接入种子培养基，在温度27.5-28.5℃、湿度30-50％的条件下摇瓶培养24-28h后，按发酵体积的10％接种到发酵培养基中，在温度27.5-28.5℃、湿度30-50％的条件下摇瓶培养240-280h，然后测定效价，挑选出遗传稳定性较好的菌株即菌种经斜面传代，各子代斜面的效价之间差异较小。

2.根据权利要求1所述的一种耐甲硫氨酸的除虫链霉菌菌种筛选方法，其特征在于：所述的含2-3％甲硫氨酸的液体培养基中的重量配比为：可溶性淀粉0.4％，酵母浸膏0.4％，麦芽浸膏1.0％，氯化钴0.002％，甲硫氨酸2-3％，其余为纯化水，调PH值为7.2-7.4。

3.根据权利要求1所述的一种耐甲硫氨酸的除虫链霉菌菌种筛选方法，其特征在于：所述的斜面培养基的重量配比为：葡萄糖1.5％，牛肉浸膏0.3％，天门冬氨酸0.05％，磷酸氢二钾0.05％，琼脂1.8％，其余为纯化水，调PH值为7.2-7.4。

4.根据权利要求1所述的一种耐甲硫氨酸的除虫链霉菌菌种筛选方法，其特征在于：所述的含2-3％甲硫氨酸的平板培养基的重量配比为：可溶性淀粉0.4％，酵母浸膏0.4％，麦芽浸膏1.0％，氯化钴0.002％，琼脂1.8％，2-3％甲硫氨酸，其余为纯化水，调PH值为7.2-7.4。

5.根据权利要求1所述的一种耐甲硫氨酸的除虫链霉菌菌种筛选方法，其特征在于：所述的种子培养基的重量配比为：玉米淀粉2.5％，花生饼粉1.0％，黄豆饼粉1.0％，酵母粉1.0％，氯化钴0.003％，其余为纯化水，调PH值为6.8-7.0。