[发明专利]一种香菇菌丝体多糖的径向流色谱分离方法

权利要求书

1.一种香菇菌丝体多糖的径向流色谱分离方法，包括步骤：

(1)脱脂：将香菇菌丝体粉末用乙醇浸没进行脱脂，过滤得到滤渣，即脱脂后香菇菌丝体粉末；

(2)超声辅助水提：将上述脱脂后香菇菌丝体粉末加入蒸馏水中形成料液，经超声波提取、离心，所得上清液浓缩后加入乙醇，冷冻过夜，收集沉淀，即得香菇菌丝体粗多糖；

(3)去蛋白：将上述香菇菌丝体粗多糖溶于蒸馏水中，加入氯仿与正丁醇混合液，剧烈混合后，离心除去蛋白，得到水提液；

(4)透析：将上述水提液装入透析袋中依次在流水和去离子水中透析，收集透析袋中的液体，得到香菇菌丝体多糖液；

(5)径向流色谱纯化：将上述香菇菌丝体多糖液用洗脱液配成溶液，离心后取上清液，将上清液流过装有阴离子交换填料的径向流色谱柱，用洗脱液进行线性梯度洗脱，收集洗脱液，每至多15mL收集一次，用苯酚-硫酸法检测各洗脱液中的多糖出峰，绘制洗脱曲线，分离出2个组分，分别收集后浓缩，得到分子量为120000Da～140000Da的第一组分和分子量为160000Da～170000Da的第二组分；

其中，所述的洗脱液为pH6.5～8.5的Tris-盐酸缓冲液、pH6.8～9.0巴比妥-盐酸缓冲液、pH6.0～8.0的磷酸盐缓冲液中的一种；

所述的阴离子交换填料为配基基团为二乙氨乙基的琼脂糖凝胶；

(6)冷冻干燥：将上述第一组分和第二组分分别在蒸馏水中透析，再经0.45μm滤膜过滤后冷冻干燥，相应地得到白色粉末状的第一香菇菌丝体多糖和第二香菇菌丝体多糖。

2.根据权利要求1所述的香菇菌丝体多糖的径向流色谱分离方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的香菇菌丝体粉末为过50～120目筛的粉末；

所述的脱脂温度为15℃～35℃，脱脂时间为20h～30h；

步骤(1)的脱脂过程重复的次数为1次～3次。

3.根据权利要求1所述的香菇菌丝体多糖的径向流色谱分离方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的脱脂后香菇菌丝体粉末的克数与蒸馏水的毫升数之比为1∶5～20。

4.根据权利要求1或3所述的香菇菌丝体多糖的径向流色谱分离方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的超声波提取的温度为50℃～80℃，功率为8KHz～20KHz，时间为0.5h～2h；

所述的离心的条件为在3000转/分钟～5000转/分钟的转速下离心10min～30min；

所述的上清液浓缩至料液体积的0.3倍～0.8倍，得到浓缩液，加入浓缩液体积3倍～5倍的乙醇，于0℃～4℃冷冻过夜，收集沉淀，即得香菇菌丝体粗多糖。

5.根据权利要求1所述的香菇菌丝体多糖的径向流色谱分离方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的氯仿与正丁醇混合液中氯仿与正丁醇的体积比为3～5∶1；

所述的离心条件为在3000转/分钟～5000转/分钟的转速下离心10min～30min；

步骤(3)的去蛋白过程重复的次数为3次～6次。

6.根据权利要求1所述的香菇菌丝体多糖的径向流色谱分离方法，其特征在于，步骤(5)中，所述的装有阴离子交换填料的径向流色谱柱是将阴离子交换填料用洗脱液浸泡2h～4h，配制成阴离子交换填料的克数与洗脱液的毫升数的百分比为15％～35％的填料液，将填料液按10mL/min～30mL/min的流速装入径向流色谱柱内，用顺时针和逆时针各平衡50mL～150mL而制得的。

7.根据权利要求1所述的香菇菌丝体多糖的径向流色谱分离方法，其特征在于，步骤(5)中，所述的溶液的浓度为5mg/mL～30mg/mL。

8.根据权利要求1或7所述的香菇菌丝体多糖的径向流色谱分离方法，其特征在于，步骤(5)中，所述的离心的条件为在5000转/分钟～9000转/分钟的转速下离心5min～15min。

9.根据权利要求1所述的香菇菌丝体多糖的径向流色谱分离方法，其特征在于，步骤(5)中，所述的上清液流过装有阴离子交换填料的径向流色谱柱的速度为1mL/min～5mL/min；

所述的上清液的总量为5mL～20mL。

10.根据权利要求1所述的香菇菌丝体多糖的径向流色谱分离方法，其特征在于，步骤(5)中，以0～0.5mol/L的洗脱液进行线性梯度洗脱，流速为5mL/min～15mL/min。