[发明专利]一种香菇菌丝体多糖的径向流色谱分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及多糖的色谱分离技术领域，具体涉及一种香菇菌丝体多糖的径向流色谱分离方法。

背景技术

香菇(Lentinula edodes)为担子菌纲白蘑科真菌，是世界名贵食用菌兼药用菌之一。香菇内含丰富的活性多糖，现代科学研究证明，香菇多糖是一种非特异免疫刺激剂，具有抑制肿瘤、抗病毒、抗氧化和增强免疫力等多方面的活性功能，且无任何毒副作用。

采用深层发酵所得香菇菌丝体提取多糖，产量大，周期短，易控制，便于工业化生产。目前多糖的分级纯化采用传统的轴流式柱中DEAE-纤维素(即：二乙氨乙基纤维素)吸附、洗脱的层析法，存在产品产量低，耗时长、分离效率低、压降大、中试放大困难等缺点，一直是限制香菇多糖产业化开发和菌业精深加工发展的技术瓶颈问题。总之，国内对食药用菌多糖的提取分离研究虽然已有一定规模和历史，但多停留在低水平重复和小规模试验阶段，创新性技术很少，未能真正使多糖的分离在工业化生产中得以大规模的应用。

为了解决上述问题，中国发明专利ZL 02138962.4中公开了一种香菇菌多糖的分离纯化工艺，该工艺采用一定分子量的超滤膜对香菇菌多糖进行分离，但由于膜包在分离过程中容易阻塞，且操作压力大，能耗高，不适于工业化生产。申请号为CN200610116956.3的中国发明专利申请中公开了一种香菇多糖的分离纯化方法，该方法提供一种在层析柱中不易堵塞，可批量生产的香菇多糖分离方法，但实际操作流速缓慢，不易线性放大。中国发明专利ZL 200510017261.5中公开了一种分离香菇多糖和香菇菌多糖的方法，该方法采用聚乙二醇沉淀多糖，虽可简化流程，降低成本，但多糖得率较低，仍不能满足大规模的需求。

径向流色谱法(Radical Flow Chromatography，RFC)是近些年发展起来的新型色谱分离技术，它采用了径向流动技术，流动相携带样品沿径向迁移，不同于传统轴向色谱柱的流体在柱内从一端流向另一端。在径向柱中，流动相和样品可以从色谱柱的周围流向柱圆心，也可以从柱圆心流向柱周围。它的主要特点是：(一)反压降较低，在相同的体积流速下，尤其适当体积流速较高时，径向流色谱柱的柱压比传统轴向柱的柱压低得多；较低的反压降，使径向流色谱可采用较高的流动相速度，从而样品出峰较快，同时对设备的要求也较低。(二)便于线性放大，由于特殊的径向流流动设计，在只增加柱长、保持色谱柱直径不变的情况下，即可线性增大样品处理量，即样品处理规模可在保持相似色谱条件下直接放大，各组分保留时间及分辨情况基本相同。(三)分离效率高，为样品流动提供了较大的横截面积，更高的体积流速，而且使样品在柱内暴露时间短，不仅有利于生物活性物质快速分离纯化，而且能提高样品的回收率和最终产物的浓度。

张正光等用径向阳离子交换柱从CL-CDl细胞培养上清液中分离纯化尿激酶原。分离结果表明，PRO-UK的活性提高了44.3倍，蛋白质含量下降了98％以上，体积缩小至1/7，回收率达87.7％(军事医学科学学院院刊，1997，2(21)：47-50)。郭立安等人利用径向离子交换色谱技术从促性腺激素的粗提物中分离纯化了促卵泡激素，得到很好的分离结果，同时比较了径向离子交换色谱于经典离子交换色谱在纯化工艺放大过程中的分离效果，证实径向流色谱比经典色谱更适合于促卵泡激素的纯化，并建立了适合大规模纯化的新工艺(色谱，2000，18(6)：577-579)。刘国诠利用CM径向柱分离小牛血清的结果是经SDSPAGE证实，所分离的牛血清白蛋白基本为纯品，总蛋白回收率大于90％；同时，他将牛血清上样品增加6倍后，所得分离结果几乎完全相同(生物工程下游技术，1993)。孙涛等用膜径向离子交换色谱分离凝血酶原复合物，该方法将流速从3ml/min提高到20ml/min，且保持分离物质的生物活性(色谱，2000，18(4)：350-352)。Gustavsson等采用琼脂糖型连续床层亲和径向色谱柱分离乳酸脱氢酶，他们首次将凝胶填料直径从10μm放大到60mm，而不影响分离效果(Per-Erik Gustavsson and Per-Olof Larsson，Journal of ChromatographyA，2001)。但径向色谱在多糖类产品的分离中尚未应用。

发明内容

本发明提供了一种快速、高效的香菇菌丝体多糖的径向流色谱分离方法，该分离方法不影响香菇菌丝体多糖天然结构及分离效果，得到的香菇菌丝体多糖含量高且保留了其生物活性，并能作为(如针剂等)药用原料。

一种香菇菌丝体多糖的径向流色谱分离方法，包括步骤：