[发明专利]利用悬浮培养葡萄细胞生产13C标记反式白藜芦醇的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物细胞培养技术，具体地说是一种通过添加¹³C标记前体生产¹³C标记反式白藜芦醇的方法。

背景技术

反式白藜芦醇(trans-resveratrol)是一种类黄酮类多酚化合物，化学名为3，5，4’-三羟基-反-二苯代乙烯)。天然的白藜芦醇存在于葡萄皮、花生及传统中药虎杖等植物体中，它属于一种植物抗毒素，在恶劣环境或是植物受到霉菌感染时产生(M.Jang，L.Cai，G.Udeani，K.Slowing，C.Thomas，C.Beecher，H.Fong，N.Farnsworth，A.Kinghorn，R.Mehta，Cancer chemopreventive activity of resveratrol，anatural product derived from grapes，Science，1997，275：218)。大量研究表明，反式白藜芦醇能够阻止低密度脂蛋白的氧化，具有抗菌、抗脂质过氧化、防治心脏病、抗癌、抗血小板凝集与血管松弛、降低血脂和抗诱变等多种药理作用，被确认为抗肿瘤剂和治疗心血管疾病的有效成分(Donnez，D.，et al.，Bioproduction of resveratrol and stilbene derivatives by plant cells and microorganisms.Trends in biotechnology，2009.27(12)：p.706-713.)。

随着反式白藜芦醇药理作用的阐明和研究，反式白藜芦醇正成为人们研究和开发的热点，在1990年到2000年的十年间共报道有170多篇白藜芦醇的研究工作，而在2000年到2002年的两年时间里白藜芦醇的研究文献骤然上升到238篇(P.Jeandet，A.C.Douillet-Breuil，R.Bessis，S.Debord，M.Sbaghi，M.Adrian，Phytoalexins from the Vitaceae：Biosynthesis，Phytoalexin Gene Expression in Transgenic Plants，Antifungal Activity，and Metabolism，Journal of Agriculture and Food Chemistry，2002，50：2731-2741)。而同位素¹³C标记反式白藜芦醇作为研究反式白藜芦醇在人和动物中代谢吸收的一个重要工具，其重要性越来越受到人们的关注。目前，市场上并没有专门供应¹³C标记反式白藜芦醇的公司，国外一些反式白藜芦醇药代动力学研究机构中的¹³C标记反式白藜芦醇的应用也主要来源于化学合成。但是，化学合成除了造价昂贵之外，其生产过程毒性较大也成为制约了这种方式生产的¹³C标记反式白藜芦醇在临床研究中的应用。葡萄细胞培养作为生产¹³C标记反式白藜芦醇的替代方法已受到关注(Krisa，S.，et al.，Stilbene production by Vitis vinifera cell suspension cultures：methyl jasmonate induction and ¹³C biolabeling.J.Nat.Prod，1999.62(12)：p.1688-1690；Aumont，V.，et al.，Production of highly C-13-labeled polyphenols in Vitis vinifera cell bioreactor cultures.Journal of Biotechnology，2004.109(3)：p.287-294)。

目前国际上通过诱导剂及吸附剂联合诱导调控同时添加¹³C标记前体来高产量生产¹³C标记反式白藜芦醇的方法还未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用葡萄(Vitis vinifera)悬浮细胞培养体系，以一种或多种诱导剂联合诱导并与吸附剂添加相结合，同时添加¹³C标记前体的联合调控手段来生产¹³C标记反式白藜芦醇的方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：