[发明专利]一种亚洲雨林蝎毒抗菌多肽基因及制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，本发明涉及一种亚洲雨林蝎毒抗菌多肽基因，还涉及该蝎毒抗菌多肽基因的制备方法，同时还涉及该蝎毒抗菌多肽基因的用途，高活性抗菌多肽功能鉴定。具体地说，本发明涉及一种亚洲雨林蝎抗菌多肽基因的分离鉴定；涉及一种蝎抗菌多肽的抗菌谱鉴定：采用化学合成手段生产的亚洲雨林蝎毒抗菌多肽对真菌具有广谱抗性；还涉及一种蝎抗菌多肽的抗真菌功能鉴定，具有潜在抗真菌药物开发的价值。

背景技术

真菌对于健康人体而言是条件致病菌，但是当机体抵抗力低，外部条件不良时，就有可能造成系统或局部真菌感染。近年来，抗生素耐药性问题已成为全球关注的焦点。中国是世界上滥用抗生素较为严重的国家，耐药菌引起的医院感染人数，已占到住院感染患者总人数的百分之三十左右。耐药菌另一个危害是可以在不同地区、国家之间的人群之间传播。白色念球菌是引起真菌感染的常见病源菌，近年来白色念球菌对真菌药物的耐药性呈上升趋势，是临床感染控制中棘手的难题。

大量研究表明，在感染病菌或可能导致病菌感染(注射细菌或真菌，体壁损伤等)的情况下，昆虫能快速合成大量抗菌肽，迅速杀灭已侵入的病菌，并阻止病菌的继续侵染。到目前为止，在昆虫中已发现了大量的抗细菌肽，抗真菌肽，以及既抗真菌又抗细菌的抗菌肽。这些抗菌肽不仅对细菌、真菌有广谱抗菌能力，对病毒、原虫及癌细胞也有作用。此外，还有作用机制独特，对高等动物正常细胞无害等特点，在面临抗药性和筛选新的抗生素极端困难的情况下，昆虫抗菌肽可能成为抗生素的新来源。

蝎子是我国的一种传统名贵中药，2000多年前就记载了蝎子的药用史。明朝《本草纲目》更详细记载蝎主治“诸风瘾疹、中风、半身不遂、口眼歪斜、语涩、手足抽挚，小儿惊痫风搐”等多种疾病，具有抗肿瘤，杀虫，抑菌和抗菌功效，其作用主要来源于蝎尾毒腺分泌的毒液。毒液的主要成分是一类由10-100个氨基酸组成的具有多种生物活性的小分子多肽，它们可以选择性、特异性的与细胞膜上的膜蛋白相互作用，从而改变细胞对离子的通透能力，调节细胞体积、pH、膜电位、兴奋性等多种细胞代谢过程和细胞分泌、激素作用和信号转导等多种生理过程。据估计，约有100000种不同生物活性肽存在于各种蝎毒腺中。因此，蝎毒素具有重要的理论研究意义和应用开发价值。

对东亚钳蝎有实验研究表明，全蝎乙醇提取物在体外对8种表浅致病真菌均有抑制作用，尤其对裴氏着色菌、中克氏孢子丝菌、石膏样毛癣菌、絮状表皮癣菌较为敏感，其抗真菌作用优于大蒜浸出液。本发明获得的Hs1404是从亚洲雨林蝎毒腺中分离的一新基因。同时，目前涉及东亚钳蝎毒腺毒素基因的专利有7项：                                                东亚钳蝎毒素BmKAS在制药中的应用，该发明涉及东亚钳蝎毒素BmKAS在制备抗外周伤害药中的应用，以及东亚钳蝎毒素BmKAS在制备抗痛觉过敏药中的应用；一种含有双价抗虫基因的重组杆状病毒, 该发明涉及东亚钳蝎昆虫特异性神经毒素基因BmKIT与一种昆虫几丁质酶基因（Chi），获得含双价抗虫基因的重组杆状病毒AcNPV-BmKIT-Chi；蝎抗心律失常肽重组大肠杆菌及其构建方法，该发明涉及了一种蝎抗心律失常肽BmKIM基因重组大肠杆菌，用于大量生产可溶、具有抗心律失常活性的重组肽；蝎抗心律失常肽及其制备方法和应用，该发明公开了一种蝎抗心律失常肽BmKIM及其制备方法和应用，本发明所得到的重组BmKIM多肽具有高效抗心律失常活性，且可溶性好，产量高；一种人工合成的蝎氯离子通道神经毒素基因-rBmKCTa,该专利涉及到氯离子通道神经毒素BmKCT基因，采用基因工程所得的改良的重组蝎氯离子通道神经毒素对神经胶质细胞具有抑制作用，可用于制备通过抑制神经胶质细胞可以治疗的疾病的药物；一种过渡型蝎毒素BmKabT的用途,本发明公开了的过渡型蝎毒素BmKabT的用途，它可以作为一个独特的钠通道调制剂,研究钠通道组成、结构和功能的探针,可调节和治疗钠通道相关疾病的调制剂和药品,可制备调节或治疗高血钾性麻痹、先天性肌强直及其它骨骼肌疾病、第三类长QT间隔症（LQT3）、原发性心室纤颤及其他心脏疾病的调制剂或药品；一种重组蝎昆虫毒素及其可溶性表达和纯化方法，该发明涉及一种重组蝎昆虫毒素rBmKIT及其可溶性表达和纯化方法。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种从亚洲雨林蝎毒腺cDNA文库中蝎筛选获得抗真菌多肽基因。该文库毒素基因覆盖率达到95%以上。且获得抗真菌多肽基因的方法快速、简便。