[发明专利]包载硫酸长春新碱的双功能纳米粒制剂的制备和应用方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种医药技术领域的制剂及其制备和应用方法，具体是一种包载硫酸长春新碱的双功能纳米粒制剂的制备和应用方法。

背景技术

长春新碱为夹竹桃科植物长春花中提取的有效成分。其游离形式极不稳定，因此常以其硫酸盐形式(vincristine sulfate，VCR)存在。抗肿瘤作用靶点是微管，在细胞周期S期，VCR与微管蛋白结合，从而使中期细胞分裂停止，导致有丝分裂中的细胞群体明显增加，使细胞分裂停止于M期，因此是M期细胞周期特异性药物。还可干扰蛋白质代谢及抑制RNA多聚酶的活力，并抑制细胞膜类脂质的合成和氨基酸在细胞膜上的转运。临床上主要用于治疗急性淋巴细胞白血病、何杰金及非何杰金淋巴瘤，也用于乳腺癌、支气管肺癌、软组织肉瘤及神经母细胞等，但VCR对神经系统及注射局部正常组织刺激性大，剂量限制性毒性是神经系统毒性，在临床上需严格控制给药剂量，因而大大限制了其在临床上的使用。

诸多研究发现，相对于目前的VCR注射液，载VCR的脂质体可明显减轻VCR的毒副作用，如通过提高VCR对肿瘤细胞的被动靶向作用，减小对正常组织的损伤，从而达到提高抗肿瘤疗效的目的。但是这些脂质体缺乏对肿瘤细胞的主动靶向作用，因而毒副作用依然明显。叶酸受体是一种在多种癌细胞中广泛过量表达且能和叶酸分子高度识别并结合的物质。利用叶酸和叶酸受体特有的相互作用，人们将叶酸作为常用的靶向分子修饰在纳米尺寸的抗肿瘤药物载体表面，以期达到对肿瘤细胞的高度靶向作用，从而提高药物的抗肿瘤效果。本发明的目的之一即以叶酸作为靶向基团，修饰在PLGA-PEG纳米粒的表面，达到主动靶向的目的。然而，细胞膜作为细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障，在保证细胞内环境相对稳定，使各种生化反应能够有序运行的同时，却阻止了细胞外物质自由进入细胞，比如将抗肿瘤药物排斥在细胞膜外，是导致这类药物抗肿瘤疗效不佳的一个重要原因。为了解决这一难题，人们在给药系统中引入了细胞穿透肽。实验表明，在纳米粒给药系统的聚合物载体表面修饰以细胞穿透肽，如寡聚精氨酸后，可显著增强药物的吸收。虽然人们对细胞穿透肽如何携带纳米粒穿过细胞膜，进入细胞的机制还没有统一的认识，但是细胞穿透肽这种特殊的功能越来越引起了人们的重视。

经过对现有技术的检索发现，有几种PEG化的硫酸长春新碱脂质体(Rodriguez M.A.，Pytlik R.，Kozak T.，et al.Cancer 2009，115：3475-3482；Thomas D.A.，Sarris A.H.，Cortes J.，et al.Cancer 2006，106：120-127)已进入临床前实验阶段，虽然该类脂质体在体内能达到长循环的效果，但是粒径较大，一般在500nm以上，有的粒子粒径高达几十乃至上百微米，而且粒径分布很宽。如此大的颗粒进入体内后，由于缺乏血管通透性，很容易直接被网状内皮系统吞噬而难以到达肿瘤部位，导致其靶向性不高，因而相对于传统的硫酸长春新碱注射液，疗效并无显著提高(Tokudome Y.，Oku N.，Doi K.，et al.Biochim.Biophys.Acta.1996，1279：70-74)。

发明内容

本发明针对现有技术存在的上述不足，提供一种包载硫酸长春新碱的双功能纳米粒制剂的制备和应用方法，采用复乳法制备包载硫酸长春新碱的PLGA-PEG纳米粒，制备的叶酸/细胞穿透肽修饰的PLGA-PEG双功能纳米粒粒径287.2±0.8nm，具有较高载药量和包封率，以及良好的稳定性。与硫酸长春新碱水溶液，非修饰的PLGA-PEG纳米粒及叶酸修饰的PLGA-PEG纳米粒相比，该双功能纳米粒在体内外表现出良好的性能。因而，叶酸/细胞穿透肽修饰的PLGA-PEG双功能纳米载体是一种较为理想的药物载体，具有广阔的应用前景。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明涉及一种包载硫酸长春新碱的双功能纳米粒制剂的制备方法，通过复乳法将硫酸长春新碱包封于叶酸/细胞穿透肽修饰的PLGA-PEG聚合物载体中，制得双功能纳米粒制剂。

所述的叶酸/细胞穿透肽修饰的PLGA-PEG聚合物载体由PLGA-mPEG、叶酸修饰的PLGA-PEG(PLGA-PEG-folate)以及七聚精氨酸修饰的PLGA-PEG(PLGA-PEG-R₇)组成。

所述的七聚精氨酸的化学式为R₇-NH₂，即末端羧基以氨基封闭。