[发明专利]沙门氏菌的PCR检测方法及引物对无效
申请号: | 201010277412.1 | 申请日: | 2010-09-09 |
公开(公告)号: | CN102399854A | 公开(公告)日: | 2012-04-04 |
发明(设计)人: | 丁国才 | 申请(专利权)人: | 上海海帝园艺有限公司 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12Q1/10;C12N15/11 |
代理公司: | 上海汉声知识产权代理有限公司 31236 | 代理人: | 郭国中 |
地址: | 201109 上海*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 沙门氏菌 pcr 检测 方法 引物 | ||
1.一种沙门氏菌的PCR检测方法,其特征在于,包括如下步骤:
步骤一,根据沙门氏菌基因组DNA序列中的保守序列设计扩增引物;
步骤二,提取待检样品的DNA,PCR扩增;
步骤三,凝胶电泳检测扩增产物,判断样品中是否含有沙门氏菌;所述判断为:若电泳结果出现相应扩增条带,则说明样品中含有沙门氏菌。
2.如权利要求1所述的沙门氏菌的PCR检测方法,其特征在于,步骤一中,所述保守序列的碱基序列如SEQ ID NO:1所示。
3.如权利要求2所述的沙门氏菌的PCR检测方法,其特征在于,步骤二中,所述引物具体为:正向引物的碱基序列如SEQ ID NO:2所示,反向引物的碱基序列如SEQ ID NO:3所示。
4.如权利要求3所述的沙门氏菌的PCR检测方法,其特征在于,步骤二中,所述PCR扩增中,25μL反应体系具体为:10×PCR反应缓冲液2.5μL,25mmol/L的Mg2+2.0μL,2.5mmol/L的dNTP 1.0μL,5uM引物对1μL,Taq酶1U,模板溶液取2~5μL,最后补水至25μL。
5.如权利要求4所述的沙门氏菌的PCR检测方法,其特征在于,步骤二中,所述PCR扩增中的反应条件为:94℃5min,94℃ 30min,55℃ 30min,72℃30min,30个循环,72℃终延伸10min。
6.如权利要求2所述的沙门氏菌的PCR检测方法,其特征在于,步骤二中,所述扩增条带为516bp条带。
7.一种引物对,其特征在于,正向引物的碱基序列如SEQ ID NO:2所示,反向引物的碱基序列如SEQ ID NO:3所示。
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