[发明专利]一种提取微生物DNA的试剂盒及其方法

权利要求书

1.一种提取微生物DNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

裂解液I、裂解液II、抑制物去除液I，抑制物去除液II和结合液，所述裂解液I包含pH8.0 50-200mM的Tris-HCl、pH8.0 50-150mM的EDTA、0.5-3M的NaCl、0.5-2％的CTAB和0.5-2％的PVP，所述裂解液II为使用终浓度为0.5-2％的SDS，所述抑制物去除液I为100-300mM的乙酸钾、乙酸钠或乙酸铵，所述抑制物去除液II为50-200mM的硫酸铝、硫酸铵或硫酸铝铵，所述结合液包含3-6M的盐酸胍、pH7.5 10-50mM的Tris-HCl和5-50％的异丙醇。

2.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述裂解液I包含pH8.0100mM的Tris-HCl、pH8.0 100mM的EDTA、1.5M的NaCl、1％的CTAB和1％的PVP。

3.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述裂解液II为使用终浓度为2％的SDS。

4.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述抑制物去除液I为250mM的乙酸铵。

5.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述抑制物去除液II为120mM的硫酸铝铵。

6.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述结合液包含5M的盐酸胍、pH7.5 20mM的Tris-HCl和30％的异丙醇。

7.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：

提取缓冲液、漂洗液、洗脱液和玻璃纤维素膜，所述提取缓冲液包含50-150mM的异硫氰酸胍和150-200mM的磷酸钠，所述漂洗液包含pH7.55-20mM的Tris-HCl、50-80％的无水乙醇和50-200mM的NaCl，所述洗脱液为pH7.0-8.5 5-30mM的Tris-HCl，所述玻璃纤维素膜孔径为0.45μm。

8.根据权利要求7所述试剂盒，其特征在于，所述提取缓冲液包含120mM的异硫氰酸胍和181mM的磷酸钠，所述漂洗液包含pH7.5 10mM的Tris-HCl、80％的无水乙醇和100mM的NaCl，所述洗脱液为pH8.0 10mM的Tris-HCl。

9.一种提取微生物DNA的方法，包括以下步骤：

步骤1、将提取缓冲液和样品充分混匀，加入裂解液I振荡，再加入裂解液II水浴，离心取上清液，所述样品为土壤、粪便、泥沙、岩石或淤泥，所述提取缓冲液包含50-150mM的异硫氰酸胍和150-200mM的磷酸钠，所述裂解液I包含pH8.0 50-200mM的Tris-HCl、pH8.0 50-150mM的EDTA、0.5-3M的NaCl、0.5-2％的CTAB和0.5-2％的PVP，所述裂解液II为使用终浓度为0.5-2％的SDS；

步骤2、向步骤1所述上清液加入抑制物去除液I，充分混匀，冰浴，离心取上清液，所述抑制物去除液I为100-300mM的乙酸钾、乙酸钠或乙酸铵；

步骤3、向步骤2所述上清液加入抑制物去除液II，充分混匀，冰浴，离心取上清液，所述抑制物去除液II为50-200mM的硫酸铝、硫酸铵或硫酸铝铵；

步骤4、步骤3所述上清液与玻璃纤维素膜、结合液充分作用后漂洗，然后洗脱所述玻璃纤维素膜上吸附的DNA，所述结合液包含3-6M的盐酸胍、pH7.5 10-50mM的Tris-HCl和5-50％的异丙醇，所述漂洗液包含pH7.55-20mM的Tris-HCl、50-80％的无水乙醇和50-200mM的NaCl，所述洗脱液为pH7.0-8.5 5-30mM的Tris-HCl。

10.根据权利要求9所述方法，其特征在于，所述裂解液I包含pH8.0100mM的Tris-HCl、pH8.0 100mM的EDTA、1.5M的NaCl、1％的CTAB和1％的PVP，所述裂解液II为使用终浓度为2％的SDS，所述抑制物去除液I为250mM的乙酸铵，所述抑制物去除液II为120mM的硫酸铝铵，所述结合液包含5M的盐酸胍、pH7.5 20mM的Tris-HCl和30％的异丙醇。