[发明专利]一种鸡热应激蛋白70基因上的耐热性相关分子标记及其获取方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种鸡热应激蛋白70基因上的耐热性相关分子标记及其获取方法和应用。 

背景技术

分子标记辅助选择育种，是基因工程在现代家禽育种中的一项重要应用，通过分子标记的方法进行现场育种，不仅能缩短育种时限，大大减少育种的人力物力消耗，另外分子标记的多样性更使得分子标记辅助选择育种在现场育种中的应用潜力大大提高。高温季节容易引起鸡产生热应激，导致生长发育缓慢，免疫力降低，发病率和死亡率升高，给集约化的养鸡生产带来巨大的经济损失。目前生产中主要采取通风降温、日粮调控等综合措施来缓解鸡的热应激反应，但这并不能从根本上解决热应激对现在家禽养殖的影响。因此，通过育种的途径改善个体本身的热适应性是今后家禽遗传育种重要的研究方向之一，而分子标记是达到这一目的的重要手段。 

耐热力是一种适应能力，通过遗传育种手段增强家禽自身对高温的耐受力，培育耐热品系是消除热应激的根本措施，是家禽的育种方向之一，而确定耐热指标是选育耐热品系的基础。皮质酮可以作为一个准确的评价家禽应激状况的生理指标，应激会引起皮质酮的大量分泌。血浆皮质酮水平降低时，代谢速度减慢，产热减少；而当血浆皮质酮水平升高时，代谢强度加强，产热增多。淋巴细胞是重要的免疫细胞，包括T细胞和B细胞，分别直接参与细胞免疫和体液免疫应答，在机体免疫系统中起着重要的作用，其数量的多少与免疫性能息息相关。当机体受到外界刺激时（如病原体入侵，热应激等），淋巴细胞和单核细胞在血液中的含量会下降，异嗜性粒细胞增加，因此异嗜性粒细胞（H）与淋巴细胞(L)的比值升高。因此H、L和H/L值不仅是兽医临床上常用的检测方法，也是家禽抗病育种上的一个重要的免疫性状，H/L值的变化与家禽的应激程度密切相关，可以作为检测家禽应激程度的一项准确指标。由甲状腺分泌的三碘甲状腺原氨酸(T3)与应激有重要关系，T3水平下降时，代谢速度减慢，产热减少，反之亦然，是敏感的热应激指标。T淋巴细胞群是检测机体细胞免疫功能的重要指标，CD（Cluster of Differentiation）是指位于细胞膜上一类分化抗原的总称。在抗原识别过程中，CD³⁺T细胞起着信号传导作用。CD⁴⁺T细胞具有辅助细胞免疫和体液免疫应答的作用，CD³⁺、CD⁴⁺T细胞水平降低，机体的免疫水平也随之降低。 

目前热应激抗性候选基因研究主要集中在热应激蛋白家族（HSP），其中HSP70 是热应激蛋白家族中重要成员，作为主要的分子伴侣参与机体耐受性的形成。HSP70在应激适应性过程中起着重要的作用，所以Hsp70基因的多态性可能与易感性、疾病等应激存在重要的关联。目前针对鸡热适应性的分子标记研究比较少，中国专利申请200910210772.7公开了一种筛选耐热性奶牛的SNP位点及检测方法，该SNP位点为奶牛HSP70A1A基因上的碱基。通过该位点可以通过单倍型组合确定耐热性状，进行奶牛的早期筛选。本发明在鸡Hsp70的编码区找到的耐热性分子标记为首次报道。 

发明内容

本发明的目的在于根据现有的耐热性鸡品种的筛选中存在的无法从本质上减少热应激的缺点，利用辅助分子标记的方法，从遗传育种上改良鸡的耐热性的鸡热应激蛋白70基因上的耐热性相关分子标记。 

本发明另一目的在于提供上述鸡热应激蛋白70基因上的耐热性相关分子标记的获取方法。 

本发明还有一个目的在于提供上述鸡热应激蛋白70基因上的耐热性相关分子标记的应用。 

本发明上述目的通过以下技术方案予以实现： 

一种鸡热应激蛋白70基因上的耐热性相关分子标记，所述耐热性相关分子标记为A+258G和C+1437T。

上述利用分子标记对鸡耐热性的获取方法，包括如下步骤： 

（1）鸡基因组DNA的提取；

（2）设计2对特异性引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1~4所示，进行PCR扩增；

（3）扩增产物分型，A+258G位点利用PCR产物测序分型，C+1437T位点利用酶切分型。

作为一种优选方案，上述步骤中，步骤（1）中所述鸡血为抗凝血，抗凝剂为EDTA或肝素钠。所述提取是用苯酚-氯仿抽提法或试剂盒抽提。