[发明专利]白沙蒿△12脂肪酸脱氢酶(As FAD2)基因及用途

权利要求书

1.白沙蒿Δ12脂肪酸脱氢酶基因，其特征是其基因序列为SEQ 1。

2.权利要求1所述的白沙蒿Δ12脂肪酸脱氢酶基因的制备方法，其特征是首先提取白沙蒿的RNA，再反转录为cDNA；利用GenBank中已公布的其它植物的FAD2基因的核苷酸序列和氨基酸序列进行同源性分析，根据保守区设计合成一对简并引物P1、P2；以得到的白沙蒿cDNA为模板扩增得到白沙蒿FAD2核心片段核苷酸序列；根据测序得到的FAD2基因核心片段序列分别设计白沙蒿FAD2基因特异引物5’端外侧引物P3和巢式引物P4，分别与GeneRacer^TM试剂盒中自带的5’P和5’NP配对，以白沙蒿cDNA为模板，进行5’外侧和巢式PCR扩增反应，得到5’末端核苷酸序列；同样根据测序得到的白沙蒿FAD2基因核心片段序列分别设计白沙蒿FAD2基因特异引物3’端外侧引物P5和巢式引物P6，分别与GeneRacer^TM试剂盒中自带的3’P和3’NP配对，以白沙蒿cDNA为模板，进行3’外侧和巢式PCR扩增，得到3’末端核苷酸序列；将所得到的三段序列(白沙蒿FAD2核心片段核苷酸序列、5’末端核苷酸序列和3’末端核苷酸序列进行拼接，得到目标基因。

3.权利要求2所述的白沙蒿Δ12脂肪酸脱氢酶基因的制备方法，其特征是采用白沙蒿的叶片提取RNA。

4.权利要求2或3所述的白沙蒿Δ12脂肪酸脱氢酶基因制备方法中所用的相关引物，其特征是：

上游引物P1为：

5’-AARAARGYYATYCCRCCVCAYTG-3’，

下游引物P2为：

5’-TKCCAYCRYIYSATWATRW KG-3’；

P3为：5’-ACATTCATGAGCAATAAGCCAAAGACCC-3’，

P4为：5’-TGAGGGAGCTGTGGAATATAAGTTGTGG-3’，

5’P为：5’-CGACTGGAGCACGAGGACACTGA-3’，

5’NP为：5’-GGACACTGACATGGACTGAAGGAGTA-3’；

P5为：5’-ACATTCATGAGCAATAAGCCAAAGACCC-3’，

P6为：5’-TGAGGGAGCTGTGGAATATAAGTTGTGG-3’，

3’P为：5’-GCTGTCAACGATACGCTACGTAACG-3’，

3’NP为：5’-CGCTACGTAACGGCATGACAGTG-3’。

其中：R＝A or G；Y＝C or T；V＝A or C or G；K＝G or T；S＝C or G；W＝A or T

5.权利要求1所述的白沙蒿Δ12脂肪酸脱氢酶基因在油料作物的转基因工作中的应用。

6.权利要求1所述的白沙蒿Δ12脂肪酸脱氢酶基因在牧草作物的转基因工作中的应用。

7.权利要求1所述的白沙蒿Δ12脂肪酸脱氢酶基因在除权利要求4或5所述的植物外的植物中的转基因工作中的应用。

8.权利要求1所述的白沙蒿Δ12脂肪酸脱氢酶基因在除植物外的其它生物的转基因工作中的应用。