[发明专利]一种从宣木瓜果实中提取木瓜蛋白酶和SOD粗酶的方法有效
| 申请号： | 201010285096.2 | 申请日： | 2010-09-15 |
| 公开（公告）号： | CN101962634A | 公开（公告）日： | 2011-02-02 |
| 发明（设计）人： | 丁之恩;张桂敏;盛侠;任琪;王敏丽 | 申请（专利权）人： | 安徽农业大学 |
| 主分类号： | C12N9/50 | 分类号： | C12N9/50;C12N9/08 |
| 代理公司： | 安徽合肥华信知识产权代理有限公司 34112 | 代理人： | 余成俊 |
| 地址： | 230036 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 木瓜 果实 提取 木瓜蛋白酶 sod 方法 | ||
1.一种从宣木瓜果实中提取木瓜蛋白酶的方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)将新鲜宣木瓜果实洗净，去皮、去籽；
(2)向步骤(1)处理过的果实里加蒸馏水进行研磨匀浆；
(3)将步骤(2)的研磨匀浆采用超声提取，通过冰浴的方法控制超声温度为4-12℃；
(4)将经过超声提取过的浆料用离心机冷冻离心分离，温度为3-5℃，离心机的转速为6000-10000r/min；
(5)将离心所得的上层清液采用200-600目的筛网及孔径为5μm的袋式过滤器进行粗过滤，去除宣木瓜果浆中的杂质及不溶性成分，得到粗酶液；
(6)将粗酶液采用截留分子量为9000-10000道尔顿的超滤膜超滤，分离小分子杂质，得到超滤产物；
(7)将超滤后的产物进行冷冻真空干燥，得木瓜蛋白酶。
2.一种从宣木瓜果实中提取SOD复合酶的方法，其特征在于它包括以下步骤：
(1)将新鲜宣木瓜果实洗净，去皮、去籽；
(2)向步骤(1)处理过的果实里加入提取缓冲液进行研磨匀浆；
(3)将步骤(2)的研磨匀浆采用离心机冷冻离心分离，得到的上层清液为粗酶液，离心机的转速为12000-20000r/min，温度为4-12℃，分离时间为30-50min；
(4)将离心所得的粗酶液置于冰浴中，加入预冷的丙酮，搅拌15-30min，于3-4℃，4500-10000r/min冷冻离心15-20min，弃上清液，用缓冲液溶解沉淀，再透析缓冲液，收集透析液，于3-4℃下静置一夜；
(5)将静置一夜的透析液在3-4℃下、5000-20000r/min冷冻离心10-12min，收集上清液，3-4℃低温保存。
(6)将步骤(5)收集的上层清液采用截留分子量为17000-18000道尔顿的中空纤维膜进行浓缩；
(7)将浓缩后的产物进行冷冻真空干燥，得SOD复合酶。
3.根据权利要求2所述的从宣木瓜果实中提取SOD复合酶的方法，其特征在于：所述的缓冲液在100ml0.1mol/L的PH 7.8的磷酸缓冲液中，添加77.00mg DTT，5.000gPVP，充分混匀所制得的溶液。
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