[发明专利]一种从宣木瓜果实中提取木瓜蛋白酶和SOD粗酶的方法

说明书

一、技术背景

本发明属于生物工程领域，具体地说涉及一种木瓜蛋白酶和SOD酶的提取技术。

二、背景技术

木瓜蛋白酶(Papain，E C 3.4.22.2)又称木瓜酶，是一类琉基蛋白酶。广泛存在于番木瓜(Carica papaya)的果实、叶、茎和根内，其中在未成熟的乳汁中含量最丰富^[71]。它具有热稳定性好、天然卫生安全、酶活高等特点，因此在食品、日化、饲料、医药、纺织及皮革等行业有广泛应用。又因其稳定性好，对多种蛋白质均具有较好的降解作用，并且蛋白水解能力强，目前已被广泛地应用于诸多行业。在食品行业中：用于啤酒澄清、肉类嫩化、鱼类加工和饲料添加剂；在工业行业中：用于蚕茧脱胶、明胶制造、皮革脱毛等；在医疗卫生行业中：用于治疗消化不良、驱肠虫剂、水肿以及各种炎症等疾病。

现有文献表明提取和利用木瓜蛋白酶已成为当今科技研究的热点之一。以番木瓜未成熟果实的新鲜乳汁为原科生产木瓜蛋白酶，由于番木瓜种植区主要分布于经济不发达地区，因此蛋白酶生产工艺相对落后。乙引等，就木瓜蛋白酶生产工艺中的几个重要环节进行了研究，采用单宁沉降法、烘干法等制备木瓜蛋白酶。试验结果表明：在木瓜蛋白酶的制备过程中，要提高木瓜蛋白酶的质和量，必须要加入酶活性保护剂，减少酶失活，干燥过程中温度不宜过高，同时去除杂质。常用的酶保护剂有亚硫酸氢钠、EDTA、焦亚硫酸钠等。目前，木瓜蛋白酶的提取主要采用化学方法，化学方法一方面工艺条件要求很多，操作过程比较繁琐，耗时耗能均较多；另一方面，需要使用大量的化学试剂，成本很高。木瓜蛋白酶传统提取方法存在严重缺陷：木瓜青果乳汁割收方法落后，卫生条件差，乳汁损失大，褐变严重，酶活性低。目前，市场对木瓜蛋白酶需求量增长迅速，而目前的生产方式又不能满足市场的需求。

超氧化物歧化酶(SOD)是一种具有特定生物催化功能的蛋白质，由金属离子和蛋白质组成，自然界的植物、动物以及一些微生物体内是SOD的主要存在载体。SOD不仅可以作为蔬菜和水果的保鲜剂；还被作为抗氧化剂应用于果汁、罐头食品、啤酒等食品中，防止过氧化化物酶引起的食品腐败和变质现象。在食品中加入SOD可以增强抗炎、抗疲劳、抗辐射、抗衰老等保健作用。在应用领域的研究上，超氧化物歧化酶被用来当作选择性杀伤癌细胞的靶，通过破坏癌细胞超氧化物歧化酶活性，使癌细胞对毒性氧的防御能力丧失，最后使癌细胞凋亡。超氧化物歧化酶对治疗心肌梗塞、贝切特氏病等血管性心脏病、肺气肿、新生儿呼吸困难综合症、老年白内障、辐射病、胶原病、水肿以及等疾病也有疗效。此外，对由于化疗引起的白血球减少和骨髓损伤的患者通过静脉注射SOD，患者的恢复效果很好。超氧化物歧化酶(SOD)除应用于肝、肾、心脏等器官的保存和移植外，也可应用于小肠和心脏动脉缺血再灌注，及美容，整形、断肢再植等手术过程。此外，重组SOD是通过基因工程技术制备的，目前已广泛应用于研究以及与应用直接相关的基础理论研究。可见SOD在医药、食品及化妆保健品领域，具有广大市场前景。

现有文献表明在很多生物体中存在SOD酶，提取和利用SOD酶已成为当今科技研究的热点之一。专利申请号86100551公开了一种超氧化物歧化酶的提纯方法，它是将动物肝脏匀浆在二价铜盐的的条件下分步加热和透析沉淀除去杂质，提取SOD；采用硫酸铵分步盐析，除去杂蛋白，收集含SOD的蛋白质，再经透析、浓缩、干燥，可获得比活力为2789单位/毫克的SOD。专利申请号为91101832公开了一种大豆超氧化物歧化酶生产方法，它是以大豆(豆类)为原料生产大豆超氧化物歧化酶(大豆SOD)，其生产方法是：将大豆依次经过以下步骤：制作膨胀大豆、制取豆浆、调值处理、离心处理的上清液、加热过滤、超滤浓缩、干燥等工序获得SOD。但上面专利申请均因技术措施或选取的原料不当而未实施。宣木瓜，属蔷薇科木瓜属、落叶阔叶灌木。宣木瓜的营养价值与弥猴桃相媲美，以“百益之果”著称，是卫生部2003年公布30个药食兼用食品之一。经过测定，宣木瓜果实中含有较高的SOD活性，但至今没有对其提取工艺进行深入的研究，经检索，未发现有关从宣木瓜果实中提取SOD酶的报道。

发明内容

本发明提供一种从宣木瓜果实中提取木瓜蛋白酶和SOD粗酶的方法。

本发明的目的可以通过以下技术措施来实现：

一种从宣木瓜果实中提取木瓜蛋白酶的方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)将新鲜宣木瓜果实洗净，去皮、去籽；

(2)向步骤(1)处理过的果实里加蒸馏水进行研磨匀浆；