[发明专利]木芙蓉总黄酮中黄酮类化合物的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于中药检测技术领域，涉及一种木芙蓉总黄酮中黄酮类化合物的检测方法。

背景技术

木芙蓉属锦葵科植物，又名拒霜花、芙蓉木、木莲、大叶芙蓉、下排杯、地芙蓉、华木、旱芙蓉、九头花等，我国多有栽培。药用叶、花、根皮，夏秋季收。鲜用或晒干备用。全株具清热解毒、凉血消肿功效，用于痈疽肿毒初起、臁疮、烫伤、跌打损伤、目赤肿痛、肺痈、咳喘、赤白痢疾、妇人白带、肾盂肾炎等症。

木芙蓉中主要化学成分为黄酮类和甾醇类，分离得到的黄酮类成分有槲皮素、山奈酚、芸香苷、山奈酚-3-O-β-芸香糖苷、山奈酚-3-O-β-刺槐双糖苷及山奈酚-3-O-β-D-(6-E-对羟基桂皮酰基)-葡萄糖苷等。

采用木芙蓉叶加工得到中药，其黄酮类成份必须有着严格的控制，以满足医用的需要，现有木芙蓉中黄酮类成份质量的检测方法为：采用紫外分光光度法测定总黄酮；采用RP-HLPC法测定木芙蓉提取物中芦丁含量，以芦丁标准品为对照进行反向高效液相法测定：Ubondpak C18色谱柱，柱温25℃，在370nm波长处紫外检测；流动相：0.02mol/L磷酸二氢钾缓冲液(含1％冰醋酸)与甲醇以体积比为73∶27组成流动相，流速为1.0ml/min，SPD-2ASUV检测器于波长370nm检测；芦丁与木芙蓉中其他成分基线分离良好。或用ODS(150mm×4.6mm，5μm)，流动相为甲醇-水-冰醋酸(甲醇∶水∶冰醋酸体积比30∶70∶2.5)，检测波长：254nm。

采用HPLC法测定木芙蓉中槲皮甙的含量，色谱柱：ODS C18(4.6mm×250mm，10μm)；流动相为甲醇-水-冰乙酸(甲醇∶水∶冰乙酸体积比45∶55∶1.5)流速：1mL/min；检测波长：370nm。

采用HPLC法测定木芙蓉中金丝桃苷的含量，Agilent Zorbax SB C18(4.6mm×250mm，5μm)，ODS预柱。流动相：乙腈-甲醇-四氢呋喃-0.5％冰醋酸(乙腈∶甲醇∶四氢呋喃∶0.5％冰醋酸体积比为1∶1∶19.4∶78.6)，流速：1.0mL/min，柱温：30℃，检测波长：363nm。

可以看出，采用上述的方法检测起来比较麻烦，不能同时定性定量检测几种黄酮类成分；并且在同一高效液相色谱系统中，同时定性定量检测多种黄酮类成分的研究未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种木芙蓉总黄酮中黄酮类化合物的检测方法，可以一次定量检测出木芙蓉总黄酮中的槲皮苷，定性检测出木芙蓉总黄酮中的芦丁、金丝桃苷。

本发明采用的第一种技术方案是，一种木芙蓉总黄酮中黄酮类化合物的检测方法，具体按照以下步骤进行：

步骤1，

供试品溶液的制备：

称取木芙蓉总黄酮0.5g，精密称定后加入蒸馏水适量，超声溶解，功率为200w，频率为40kHz，时间为10min；然后用水稀释至50ml，加入沸点60℃-90℃石油醚萃取三次，每次50ml，石油醚液弃去，水液中再加入乙酸乙酯萃取三次，每次50ml，合并乙酸乙酯液并减压蒸干，残渣加甲醇溶解，定容至50ml，过0.45μm微孔滤膜，即得供试品溶液；

对照品溶液的制备：

精密称取芦丁、金丝桃苷、槲皮苷对照品适量，加甲醇制成每1mL分别含40.0μg、32.2μg、28.0μg的混合溶液，即得；

采用的检测仪器：高效液相色谱仪、紫外检测器；

采用的色谱检测条件：按照中国药典2005版一部附录VID高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：XBridge Shield RP18色谱柱，4.6mm×250mm，5μm；流动相梯度为：

在0-10分钟，流速1.0ml/min，水与乙腈体积比为85∶15，

在10-15分钟，流速1.0ml/min，水与乙腈体积比为82∶18，

在15-20分钟，流速1.0ml/min，水与乙腈体积比为81∶19，

在20-25分钟，流速1.0ml/min，水与乙腈体积比为80∶20，

在25-28分钟，流速1.0ml/min，水与乙腈体积比为79∶21，

在28-31分钟，流速1.0ml/min，水与乙腈体积比为78∶22，

在31-33分钟，流速1.0ml/min，水与乙腈体积比为77∶23，

在33-36分钟，流速1.0ml/min，水与乙腈体积比为76∶24，

在36-38分钟，流速1.0ml/min，水与乙腈体积比为75∶25，