[发明专利]抗氧化活性真菌提取物的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及食品和保健品、生物制药和酶工程领域，具体的说是利用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、果胶酶等三种不同的酶生产真菌高抗氧化活性物质的方法。

背景技术

现代研究表明，人体内的自由基被认为是引起生物细胞氧化性损伤，进而引起肿瘤、衰老、心脑血管疾病等多种疾病的重要因素之一，在人体内的自由基中，主要是超氧阴离子自由基和羟自由基等氧自由基，超氧阴离子自由基是在生命活动的代谢过程中产生的一种重要的自由基，具有很强的氧化能力，羟自由基是最活泼的自由基，也是毒性最大的自由基，它们可以与活细胞中任何分子发生反应造成损害，且反应速度极快，被破坏的分子遍及糖类、氨基酸、蛋白质、脂、磷脂、核苷和DNA等，因此，研究和开发抗氧化剂对延缓衰老、防治疾病和开发食品与保健品等具有重大意义。

研究表明，高等真菌细胞内含有抗氧化物质，并可通过热水、乙醇、乙酸乙酯等溶剂提取，但是，由于真菌细胞壁的存在，限制了胞内物质的提取效果。近年来，随着酶工程的发展，研究者将酶解技术用于真菌细胞内物质的提取，因为酶可以降解细胞壁，消除了其机械阻碍，利于胞内物质的释放，从而明显提高提取效果。

尽管利用酶法降解真菌细胞壁可显著提高胞内物质的提取产量，但是，酶法生产的真菌胞内提取物的抗氧化生物活性如何目前尚没有报道。我们对多种酶类的比较研究表明，与热水提取法相比，不同酶类不仅对真菌菌丝体胞内物质的提取率有显著的影响，而且，对提取物的抗氧化活性也有显著的影响，深入研究表明，提取物中的抗氧化活性物质主要是醇不溶提取物，而且，有些酶尽管使醇不溶提取物产量显著提高，但同时却导致获得的醇不溶提取物的抗氧化活性也显著降低，这显然不利于利用酶法生产高抗氧化活性醇不溶提取物，更会导致酶法制备的醇不溶提取物的药效降低，严重影响对疾病的治疗，用于保健品的开发时也会显著降低其抗氧化、延缓衰老、提高健康水平等保健作用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术的不足，提供一种抗氧化活性真菌提取物的制备方法。

本发明解决上述技术问题采用的技术方案是：一种抗氧化活性真菌提取物的制备方法。其包括如下步骤：

(1)按1％(干重比)的比例向菌丝体中加入木瓜蛋白酶、或中性蛋白酶、或果胶酶；

(2)以重量比1∶10的比例加入蒸馏水，匀浆；

(3)在pH4.5-7.5和温度45-50℃下酶解2小时；

(4)酶解结束后，将酶解混合液加热升温到100℃灭活酶，并维持2小时以便释放提取其胞内物质；

(5)将提取液于5000转/分钟下离心20分钟，收集上清液；

(6)在50℃温度下，减压浓缩上清液至原体积的1/4。

(7)向浓缩液中加入3倍体积的食用乙醇，于4℃下沉淀24小时；

(8)5000转/分钟下离心20分钟，收集沉淀。

(9)将沉淀经真空冷冻干燥后，即获得抗氧化活性的醇不溶提取物冻干粉末。

本发明方法与热水提取法制备真菌醇不溶提取物相比，不仅一定程度上提高了醇不溶提取物的产量，而且更重要的是显著提高了醇不溶提取物的抗氧化活性，经本发明可使不同种类的真菌的菌丝体醇不溶提取物产量提高10.0-74.1％，总抗氧化活性提高9.8-78.4％，超氧阴离子自由基清除活性提高48.5-192.2％；与热水提取法相比，本发明方法也显著减少了操作时间和降低了能量消耗。本发明是一种简便、高产、低耗制备高抗氧化活性真菌醇不溶提取物的方法。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步说明。

实施例1

一种木瓜蛋白酶高产制备高抗氧化活性菌丝体醇不溶提取物的方法，其首先向1000克发酵菌丝体中，按重量比1％的比例加入木瓜蛋白酶10克，并以重量比1∶10的比例加入蒸馏水后，匀浆，在50℃温度和pH7.0下进行酶解2h；酶解结束后，将酶解混合液加热升温到100℃灭活酶，并维持2小时提取其胞内物质，将提取液在5000rpm离心20min，收集上清液，向上清液中加3倍体积的食用乙醇后于4℃下沉淀24小时，5000rpm离心20min，收集沉淀，即为醇不溶提取物，将醇不溶提取物经真空冷冻干燥后，即获得抗氧化活性的醇不溶提取物冻干粉末。经测定本发明制备的醇不溶提取物产量为9.73克，比对照热水法产量提高74.1％，经试剂盒法测定，醇不溶提取物的总抗氧化活性比对照热水法提高了20.0％，超氧阴离子自由基清除活性比对照热水法提高了192.2％。

实施例2