[发明专利]计数并鉴别微生物的方法

权利要求书

1.一种用于检测、计数和鉴别微生物的方法，其包括：(a)将液体样品过滤通过适用于截留微生物的膜，(b)将膜用于扩增步骤，其中所述扩增步骤含有一或多种检测剂，以及(c)检测一或多种微生物的存在/不存在、所检测到的微生物的数目以及类型。

2.权利要求1的方法，其中所述液体样品是从50到1000毫升，所述膜选自具有由疏水分隔物所分隔的亲水区域的PVDF膜，扩增步骤的时间为约30分钟到约90分钟，并用适用于所选定的检测剂的装置进行检测。

3.权利要求1的方法，其中所述扩增是基于核酸的扩增体系，且所述检测剂选自荧光标记的核酸、肽核酸探针和它们的混合物，并被数字成像系统所读取。

4.权利要求1的方法，其中所述扩增是聚合酶链反应(PCR)形式的基于核酸的扩增体系，且所述检测剂选自荧光标记的核酸、肽核酸探针和它们的混合物，并被数字成像系统所读取。

5.权利要求1的方法，其中所述扩增是基于核酸的扩增体系，所述试剂选自DNA靶和RNA靶，且所述检测剂选自由荧光标记的核酸、肽核酸探针和它们的混合物，并被数字成像系统所读取。

6.权利要求1的方法，其中所述扩增是聚合酶链反应(PCR)形式的基于核酸的扩增体系，所述试剂选自DNA靶和RNA靶，且所述检测剂选自荧光标记的核酸、肽核酸探针和它们的混合物，并被数字成像系统所读取。

7.权利要求1的方法，其中用选自X射线胶片、对膜上的比色反应的观察检测、对荧光标记的观察检测的方法或用数字成像读取所述检测剂。

8.权利要求1的方法，其中所述扩增步骤选自聚合酶链反应(PCR)、基于核酸序列的扩增(NASBA)、链置换扩增(SDA)和联动线性扩增(LLA)，且在热循环仪或其他温度控制装置中将膜在从约室温25℃到约90℃的温度下孵育约30分钟到约90分钟。

9.权利要求6的方法，其中在扩增之前将膜孵育1到约4个小时。

10.权利要求1的方法，其中检测剂是荧光标记。

11.权利要求1的方法，其中检测剂是放射性标记。

12.权利要求1的方法，其中检测剂是比色标记。

13.权利要求1的方法，其中检测剂是酶标记。