[发明专利]构建前列腺癌细胞体外浸润模型

权利要求书

1.一种构建前列腺癌细胞体外浸润模型，其特征在于：取对数生长期生长良好的肿瘤细胞，采用侵袭小室法构建体外侵袭模型，将无聚碳酸酯聚乙烯吡咯烷酮多孔滤膜粘附于侵袭小室的上、下室之间，在滤膜的上表面铺以50ul的基质胶于37℃下作用1小时，使胶凝固，肿瘤细胞离心后以无血清的F12培养液重悬，加到侵袭小室的上室中，下室加入10%胎牛血清的F12培养液，置37℃、5％的CO₂培养箱中培养约10小时，计数。

2.根据权利要求1所述的构建前列腺癌细胞体外浸润模型，其特征在于：取对数生长期生长良好，长至70％密度的前列腺癌细胞，用F12培养液预处理细胞两天；在无聚碳酸酯聚乙烯吡咯烷酮8um孔径多孔滤膜的上表面铺以50ul的浓度为1g/L基质胶于37℃下作用1小时，使胶凝固，再以无血清培养液洗涤两次后备用；将处理过的多孔滤膜粘附于侵袭小室的上室底部，并在滤膜下室面做标记；下室加入10%胎牛血清的F12培养液；将粘有多孔滤膜的上室插入下室，并确保上、下室间无气泡；取生长至对数期的上述癌细胞，用2.5g/L胰酶消化离心后以无血清的F12培养液重悬，以10⁵个细胞加到侵袭小室的上室中；盖上帽子，置37℃、5％的CO₂培养箱中培养约10小时；取出滤膜，用棉签拭去滤膜上表面细胞；用0.1%的结晶紫染色数分钟，于200倍光镜下计数多孔滤膜下室面侵袭的细胞数，计数中间和四周共5个视野，每组计数三份样本，求出平均数，重复上述过程1次。

3.针对权利要求1或2所述构建前列腺癌细胞体外浸润模型使用的侵袭小室，其特征在于：由有机玻璃材制的下室、上室和帽部组成，其中，所述的下室设有一圆底形小孔，圆底形小孔上方为一延至上表面的扩径部，在扩径部与圆底形小孔间形成一平台；所述的上室外廓为T形，其内设一孔径与圆底形小孔的孔径相同的通孔，上室的下部插在扩径部内，周向与扩径部匹配，底部与平台贴合，上室上部的底面与下室的上表面贴合。

4.根据权利要求3所述的侵袭小室，其特征在于，至少上室的下部外廓与下室的扩径部表面为磨砂玻璃。

5.根据权利要求3或4所述的侵袭小室，其特征在于，下室与上室的外廓为圆柱形，上室的上部与下室的外径相同，当上室的下部插至下室的扩径部的平台时，上、下室形成一密配合的圆柱体，帽部盖在上室的上部平面处，帽部与上室的上部外廓周围有环隙。

6.针对权利要求1或2所述构建前列腺癌细胞体外浸润模型的用途，用于构建前列腺癌细胞体外浸润筛药模型。