[发明专利]构建前列腺癌细胞体外浸润模型

说明书

技术领域

本发明涉及构建前列腺癌细胞体外浸润模型，用于构建筛药模型，属生物医药技术领域。 

背景技术

建立筛药模型，是提高药物筛查效率的手段，如下述参考文献： 

1、  储剑虹. 前列腺癌淋巴道转移相关基因的探索. 2005年4月。

2、  新药（西药）临床前的研究指导原则汇编。 

3、  细胞毒类抗肿瘤药物非临床研究技术指导原则（第二稿） 2006年1月。 

4、   钟恩宏，孙祖越等，Bcl-2基因家族在前列腺增生与前列腺癌形成中的作用， 《实用癌症杂志》2002，17（5）：553-560。 

5、  钟恩宏，孙祖越，顾正，吴建辉，朱焰，何桂林，刘桂明.　依立雄胺前列腺癌细胞（LNCaP）前列腺特异性抗原和Bcl-2蛋白体外表达抑制作用，《中国药理学与毒理学杂志》2003，17(1):29-34。 

6、  钟恩宏，孙祖越，吴建辉，朱焰. 依立雄胺对激素依赖型人前列腺癌细胞的体外抑制作用，《中国新药与临床杂志》，2004，23(8)：485-488。 

7、  储剑虹，孙祖越，人前列腺癌移植性转移动物模型的研究进展，《实验动物与比较医学》2005，25(2)：119-125。 

8、  储剑虹，吴建辉，朱焰，蒋秀蓉，刘桂明，何桂林，孙祖越，利用PC-3M-1E8细胞亚系建立人前列腺癌淋巴道转移模型，《中国药理学与毒理学杂志》  2005，19(2)：140-145。 

9、   Jian-hong Chu, Zu-yue Sun, Xue Lian Meng, Jian Hui Wu, Gui Lin He, Gui Ming Liu and Xiu Rong Jiang. Differential metastasis-associated gene analysis of prostate carcinoma cells derived from primary tumor and spontaneous lymphatic metasis in nude mice with orthotopic implantation of PC-3M cells. Cancer Letters 2006, 233(1): 79-8。 

10、储剑虹，李志玲，孟雪莲，吴建辉，刘向云，邱晓燕，朱焰，刘桂明，何桂林，蒋秀蓉，曹霖，孙祖越. 利用基因芯片法探索人前列腺癌细胞PC-3M在裸鼠体内淋巴道转移相关基因. 《中国癌症杂志》2006，16(1)：31-34。 

发明内容

本发明的目的在于：构建前列腺癌细胞体外浸润模型。 

本发明目的通过下述技术方案实现： 

一种构建前列腺癌细胞体外浸润模型，取对数生长期生长良好的肿瘤细胞，采用侵袭小室法构建体外侵袭模型，将无聚碳酸酯聚乙烯吡咯烷酮多孔滤膜粘附于侵袭小室的上、下室之间，在滤膜的上表面铺以50ul的基质胶于37℃下作用1小时，使胶凝固，前列腺癌细胞离心后以无血清的F12培养液重悬，加到侵袭小室的上室中，下室加入10%胎牛血清的F12培养液，置37℃、5％的CO₂培养箱中培养约10小时，计数。

具体，提供一种构建前列腺癌细胞体外浸润模型：取对数生长期生长良好，长至70％密度的前列腺癌细胞，用F12培养液预处理细胞两天；在无聚碳酸酯聚乙烯吡咯烷酮8um孔径多孔滤膜的上表面铺以50ul的浓度为1g/L基质胶于37℃下作用1小时，使胶凝固，再以无血清培养液洗涤两次后备用；将处理过的多孔滤膜粘附于侵袭小室的上室底部，并在滤膜下室面做标记；下室加入10%胎牛血清的F12培养液；将粘有多孔滤膜的上室插入下室，并确保上、下室间无气泡；取生长至对数期的上述癌细胞，用2.5g/L胰酶消化离心后以无血清的F12培养液重悬，以10⁵个细胞加到侵袭小室的上室中；盖上帽子，置37℃、5％的CO₂培养箱中培养约10小时；取出滤膜，用棉签拭去滤膜上表面细胞；用0.1%的结晶紫染色数分钟，于200倍光镜下计数多孔滤膜下室面侵袭的细胞数，计数中间和四周共5个视野，每组计数三份样本，求出平均数，重复上述过程1次。