[发明专利]一种利用木瓜蛋白酶酶解猪皮胶原蛋白制备的抗冻多肽

权利要求书

1.一种抗冻多肽，其特征在于：所述多肽的氨基酸序列为Gly-Pro-Arg-Gly-Leu-Hyp-Gly-Glu-Arg-Gly-Arg-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly。

2.一种如权利要求1所述的抗冻多肽的制备方法，其特征在于：以猪皮胶原蛋白为原料，采用木瓜蛋白酶对其进行酶解，分离纯化、冷冻干燥得到抗冻多肽；酶解条件为：pH为7.0、温度是37℃、酶解时间为30分钟、酶-底物配比为1:10（w/w）；所述酶为木瓜蛋白酶；所述分离纯化的具体步骤为：酶解产物首先利用Sephadex G-50凝胶色谱进行分离，洗脱液为去离子水，流速为1 mL/min，洗脱峰在225nm下进行测量；收集具有最佳抗冻活性的峰，再用Sulfopropyl-Sepadex C-25阳离子交换色谱进行分离，洗脱液为NaCl浓度梯度为0-0.5 M的0.01mol/L pH7.0的磷酸缓冲液，流速为0.5mL/min；收集具有最佳抗冻活性的峰，利用RP-HPLC－C18反相高效液相色谱再进行进一步的分离，反相HPLC的分离条件是用10%-90% （v/v）乙腈溶液梯度洗脱，流速为1mL/min，收集最具活性的峰，得到高纯度的特异性抗冻多肽。