[发明专利]一种植物表达载体

权利要求书

1.一种表达载体，按照包括如下步骤的方法得到：在出发表达载体pZP201的HindIII和EcoRI酶切位点间插入SEQ ID NO：4所示DNA片段，得到中间载体I；再向中间载体I中的ScaI和ScaI酶切位点间插入含有如下片段的DNA片段：LB、RB和SEQ ID NO：3所示DNA片段，得到目的表达载体；

其中，RB位于SEQ ID NO：3所示DNA片段的5′端上游，LB位于SEQ ID NO：3所示DNA片段的3′端下游；

所述RB的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示，所述LB的核苷酸序列如SEQ IDNO：8所示。

2.一种表达载体，按照包括如下步骤的方法得到：

(1)用HindIII和EcoRI酶切载体pZP201，回收载体大片段；用HindIII和EcoRI酶切载体pWMB006，回收4.0kb片段；将所述载体大片段与所述4.0kb片段连接，得到重组载体，记作pWMB011；

(2)用KpnI和SacI酶切pWMB011，回收载体大片段；用KpnI和SacI酶切pBluescript II-KS(-)，回收108bp片段；将所述载体大片段与所述108bp片段连接，得到重组载体，记作pWMB012；

(3)以SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示DNA片段为引物，以pCAMBIA3301载体为模板，进行PCR扩增，得到PCR扩增片段；用HindIII和EcoRI酶切PCR扩增片段，回收酶切产物；用HindIII和EcoRI酶切载体pZP101，回收载体大片段，将所述载体大片段与所述酶切产物连接，得到重组载体，记作pWMB010；

(4)用ScaI酶切pWMB012，回收载体大片段；用ScaI酶切pWMB010，回收3.0kb片段，将所述载体大片段与所述3.0kb片段连接，得到重组载体，即为目的表达载体；

所述载体pWMB006按照包括如下步骤的方法得到：用HindIII单酶切载体pRTL2，回收2460bp片段；用HindIII单酶切载体pAHC25，回收4175bp的片段；将所述2460bp片段与所述4175bp片段连接，得到重组载体，记作pWMB002；用BamHI及SacI双酶切pWMB002，回收4635bp片段；用BamHI及SacI双酶切载体pTCK303，回收541bp片段；将所述4635bp片段与所述541bp片段连接，得到载体pWMB006。

3.权利要求1或2所述的表达载体在农杆菌介导的植物遗传转化中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述植物为小麦、玉米或水稻。

5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于：所述小麦优选为小麦品种新春9号。

6.权利要求1或2所述的表达载体在植物育种中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述植物为小麦、玉米或水稻。

8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于：所述小麦优选为小麦品种新春9号。