[发明专利]一种H5N1禽流感病毒样颗粒疫苗的规模化制备方法

说明书

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，涉及一种新型高致病性H5N1禽流感病毒样颗粒(VLPs)的构建、规模化制备方法。

技术背景

流感是危害人类健康的重要传染病。其病原体属于正粘病毒科流感病毒属，根据病毒核蛋白抗原性不同，分为A、B和C三型。A型流感病毒(Influenza A Virus，IAV)为有囊膜的RNA病毒，基因组由分节段的8个单股负链RNA片段组成。根据病毒粒子表面血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)抗原性不同，A型流感病毒分为16种不同的HA亚型(H1-H16)和9种不同的亚型NA(N1-N9)。

A型流感病毒宿主范围广泛，具有高度的变异性，被认为是未来流感大流行的最大威胁。人类历史上发生过3次流感大暴发，分别是1918年由H1N1亚型流感病毒引起的西班牙大流感、1957年由H2N2亚型流感病毒引起的香港流感和1968年由H3N2亚型流感病毒引起的亚洲流感。2009年4月由人流感病毒、禽流感病毒和猪流感病毒重配产生甲型H1N1流感病毒，具有新的抗原性和极强的水平传播能力，引起巨大的公共卫生恐慌。所幸的是，这种新型H1N1流感病毒感染的死亡率较低。

对人类来说，H5N1型流感病毒是一种新型流感病毒，1997年在香港首次从人体分离到H5N1毒株。此后，H5N1禽流感病毒先后在亚洲、欧洲和非洲的60多个国家引起家禽和野禽的禽流感暴发，随后直接从禽传染到人，导致500多人感染，死亡率约60％。由于人群中先前存在的流感病毒抗体不能中和抵抗该型病毒，增加了该病毒在人群中爆发大流行的可能。尤其令人担忧的是，如果这种高致病性H5N1禽流感病毒因抗原变异及与人流感病毒(如新型H1N1流感病毒)之间发生基因重配产生能在人群中迅速传播和引起流感大流行新病毒株时，将会对人类造成可怕的后果。

同其它病毒性疫病一样，人禽流感的预防主要依赖于疫苗免疫接种。现行生产的H5N1人用禽流感疫苗是采用传统季节性人流感疫苗方法制备的全病毒灭活疫苗或裂解型疫苗。人H5N1禽流感疫苗毒株系采用“反向遗传操作技术”，用来源人感染患者H5N1病毒分离株的HA和NA编码基因替换季节性H1N1流感病毒基因组中相应基因产生的重配株，该重配株能编码H5N1禽流感病毒的HA和NA抗原，其它编码基因则来源H1N1疫苗株基因组，以降低H5N1禽流感病毒的致病性。尽管如此，采用这种重配H5N1毒株按传统流感疫苗工艺生产疫苗仍面临许多困难。包括：H5N1病毒培养与实验操作有严格的生物安全要求，疫苗生产必须在三级生物安全实验室(BSL3)内操作，对生产人员安全构成威胁，并导致成本升高；病毒灭活不彻底导致的毒力残留给疫苗制品的安全造成巨大风险；因毒力强引起鸡胚致死，难以在鸡胚中高滴度增殖；此外，在H5N1禽流感爆发时势必会增加对疫苗总量的要求，而爆发期间会引起鸡的大量死亡，很难获得满足生产能力需求的鸡胚。尤其重要的是，传统流感疫苗生产工艺制备的H5N1禽流感疫苗免疫原性较差，疫苗接种难以诱导持久免疫和交叉保护。因此，研发安全、高效的H5N1禽流感新型疫苗显得尤为迫切。