[发明专利]猪蓝耳病病毒与疫苗及二者的生产方法

权利要求书

1.一种猪蓝耳病病毒的大规模生产方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)微载体生物反应器中，加入1.5×10⁷～4.5×10⁷cells/g微载体的传代细胞及细胞生长液，启动细胞吸附程序，使微载体与传代细胞充分结合后，启动细胞培养程序，培养传代细胞；

2)上述传代细胞培养至6.0×10⁹cells/L～2.6×10¹⁰cells/L时换用细胞维持液，按照感染复数为M.O.I.＝0.0001～1.5接种猪蓝耳病病毒，启动病毒吸附程序，使病毒与微载体上的细胞吸附完全后，换用病毒培养程序，扩增猪蓝耳病病毒；

3)在生物反应器中收获猪蓝耳病病毒液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物反应器为微载体悬浮培养生物反应器。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述生物反应器为潮汐式微载体悬浮培养生物反应器。

4.根据权利要求3所述的猪蓝耳病病毒的大规模生产方法，其特征在于，所述潮汐式微载体悬浮培养生物反应器的程序为载体上下运行频率为0～10mm/s，培养液面在载体瓶中上下端点停留时间为0～2min。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述微载体为片状、球形或网状。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述微载体的成分为聚酯、明胶或多糖。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述微载体添加量为40～75g/L。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述猪蓝耳病病毒是猪蓝耳病病毒强毒株、猪蓝耳病病毒弱毒株或其他猪蓝耳病病毒分离株。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述制苗用细胞为CL2621细胞、MA104细胞、Marc-145细胞或其他传代细胞株。

10.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述细胞生长液，配方为MEM培养基加3％～5％的牛血清，培养条件为温度36.5℃～37.5℃，pH值调节7.0～8.0，溶氧调节10％～80％，二氧化碳浓度为0％～10％。。

11.按照权利要求1所述的方法，其特征在于步骤2)中所述细胞维持液使用MEM培养基加0.5％～1.5％的牛血清配制而成，其培养条件为控制在36.5℃～37.5℃，pH调节7.2～7.5，溶氧调节25％～80％，二氧化碳浓度为1％～5％。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤3)猪蓝耳病病毒液的体积为2.5L～1000L。

13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中生物反应器收获方式为分批培养收获。

14.由权利要求1～13任意一项制备的猪蓝耳病病毒。

15.一种猪蓝耳病灭活疫苗的大规模生产方法，其特征在于，包括如下步骤：由权利要求1～13任意一项方法制备猪蓝耳病病毒，收获的病毒液加入灭活剂，灭活后加入佐剂、乳化剂，制得猪蓝耳病灭活疫苗。

16.由权利要求15所述的方法制备的猪蓝耳病病毒灭活疫苗。

17.一种猪蓝耳病活疫苗的大规模生产方法，其特征在于，包括如下步骤：由权利要求1～13任意一项方法制备猪蓝耳病病毒，收获的病毒液加入冻干保护剂进行冻干，制得猪蓝耳病活疫苗。

18.由权利要求17所述的方法制备的猪蓝耳病活疫苗。