[发明专利]兽用狂犬病病毒与疫苗及二者的生产方法

权利要求书

1.一种兽用狂犬病病毒的生产方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)微载体生物反应器中，微载体密度为40～80g/L，加入2.0×10⁷～5.0×10⁷cells/g微载体的传代细胞及细胞生长液，启动细胞吸附程序，使微载体与传代细胞充分结合后，启动细胞培养程序，培养传代细胞；

2)上述传代细胞培养至4.0×10⁹cells/L～8×10¹⁰cells/L时换用细胞维持液，按照感染复数为M.O.I.＝0.001～1接种狂犬病病毒，启动病毒吸附程序，使病毒与微载体上的细胞吸附完全后，换用病毒培养程序，扩增狂犬病病毒；

3)采用半量换液连续收毒工艺，病毒培养2～5天后，第一次收获病毒液，收获比例为总培养体积的50％，继续培养9～11天后，每24h收获换液一次，收获比例为总培养体积的50％，收获狂犬病病毒。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物反应器为微载体悬浮培养生物反应器。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物反应器为潮汐式微载体悬浮培养生物反应器。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述微载体为网状、球形或片状。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述微载体的成分为聚酯、明胶或多糖。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述细胞生长液为含5％～10％牛血清的培养基。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述细胞维持液为含1％～5％牛血清的培养基。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述微载体悬浮培养生物反应器的培养条件为温度36℃～37℃，CO₂浓度为2.5％～5％，培养液pH值为7.0～7.4。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述狂犬病病毒液的体积为2.5L～1000L。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述的收获的次数为10～12次。

11.根据权利要求1～10任意一项方法制备的狂犬病病毒。

12.一种兽用狂犬病抗原的生产方法，其特征在于，由权利要求1～9任意一项方法制备狂犬病病毒后，收获病毒液，冻融，灭活纯化制得狂犬病毒抗原。

13.根据权利要求12所述的方法制备的狂犬病抗原。

14.一种兽用狂犬病疫苗的生产方法，其特征在于，由权利要求1～10任意一项方法制备狂犬病病毒后，收获病毒液，冻融，灭活纯化制得狂犬病毒抗原，加入佐剂即可制得兽用狂犬病灭活疫苗。

15.根据权利要求14所述的方法制备的狂犬病灭活疫苗。