[发明专利]兽用狂犬病病毒与疫苗及二者的生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种兽用狂犬病病毒与疫苗及二者的生产方法，属于生物制品技术领域。

背景技术

狂犬病是由狂犬病病毒(Rabies virus，RV)感染引起的一种病症严重、病死率极高的自然疫源性人兽共患传染病，死亡率几乎100％，目前尚无有效的治疗措施。野生动物是RV的主要储存宿主，人一旦被携带狂犬病毒的此类动物咬伤，就会感染发病，其病死率为100％。根据卫生部最新公布的传染病疫情统计数据，显示近年来狂犬病继续呈现凶险的迹象。但是狂犬病没有特殊有效的治疗手段，注射狂犬病抗原是唯一有效手段。

目前市场上的狂犬病疫苗基本都是采用转瓶工艺传代细胞培养的，大规模生产需要大量的物力人力资源，成本较高，并且批间差异大，质量不稳定。

高效的疫苗生产需要大量的以高产量从宿主系统中生产出病毒。病毒株生长的培养条件对于获得该株系的可接受的高产量来说具有重大意义。因此，为了最大化所想要的病毒的产量，系统和培养条件都必须特定地适合于提供对于产生所想要的病毒来说有利的环境。

发明内容

本发明主要目的是提供一种狂犬病病毒及疫苗的生产方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)微载体生物反应器中，微载体密度为40～80g/L，加入2.0×10⁷～5.0×10⁷cells/g微载体的传代细胞及细胞生长液，启动细胞吸附程序，使微载体与传代细胞充分结合后，启动细胞培养程序，培养传代细胞；

2)上述传代细胞培养至4.0×10⁹cells/L～8×10¹⁰cells/L时换用细胞维持液，按照感染复数为M.O.I.＝0.001～1接种狂犬病病毒，启动病毒吸附程序，使病毒与微载体上的细胞吸附完全后，换用病毒培养程序，扩增狂犬病病毒；

3)采用半量换液连续收毒工艺，病毒培养2～5天后，第一次收获病毒液，收获比例为总培养体积的50％，继续培养9～11天后，每24h收获换液一次，收获比例为总培养体积的50％，收获狂犬病病毒；

4)收获的病毒液，冻融，灭活纯化制得狂犬病毒抗原；

5)加入佐剂混合后制得狂犬病灭活疫苗。

优选地，本发明所述生物反应器为微载体悬浮培养生物反应器。

更优选地，本发明所述生物反应器为潮汐式微载体悬浮培养生物反应器。

优选地，本发明所述微载体为网状、球形或片状。

优选地，本发明所述微载体的成分为聚酯、明胶或多糖。

更优选地，本发明所述微载体为网状的聚酯纤维。

优选地，本发明所述细胞生长液为含5％～10％牛血清的DMEM培养基。

更优选地，本发明所述细胞维持液为含1％～5％牛血清的DMEM培养基。

优选地，本发明所述微载体悬浮培养生物反应器的培养条件为温度36℃～37℃，CO₂浓度为2.5％～5％，培养液pH值为7.0～7.4。

优选地，本发明所述步骤3)中所述狂犬病病毒液的体积为2.5L～1000L。

优选地，本发明所述步骤3)中所述的收获的次数为10～12次。

本发明的另一方面为使用本发明方法制备的狂犬病病毒。

本发明的另一方面为提供一种兽用狂犬病抗原的生产方法，即由本发明方法制备狂犬病病毒后，收获病毒液，冻融，灭活纯化制得狂犬病毒抗原。

本发明的又一方面为使用上述方法制备的狂犬病病毒抗原。

本发明的另一方面为提供一种兽用狂犬病疫苗的生产方法，即由本发明方法制备狂犬病病毒后，收获病毒液，冻融，灭活纯化制得狂犬病毒抗原，加入佐剂即可制得兽用狂犬病灭活疫苗。

本发明的又一方面为使用本发明方法制备的狂犬病灭活疫苗。

技术效果

与现有技术相比，本发明的狂犬病病毒的生产方法，具有以下有益效果：