[发明专利]类单胺氧化酶C类脱水酶MaoC基因克隆及蛋白的制备方法及其应用无效
申请号: | 201010295972.X | 申请日: | 2010-09-28 |
公开(公告)号: | CN101979589A | 公开(公告)日: | 2011-02-23 |
发明(设计)人: | 张修国 | 申请(专利权)人: | 山东农业大学 |
主分类号: | C12N15/55 | 分类号: | C12N15/55;C12N9/14;C12N15/10;C12N15/70;C12P7/64 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 271018 *** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 单胺氧化酶 脱水酶 maoc 基因 克隆 蛋白 制备 方法 及其 应用 | ||
1.类单胺氧化酶C类脱水酶基因,其特征在于:其基因序列如Seq ID No:1所示;其蛋白质氨基酸序列为SEQ ID NO:2所示。
2.如权利要求1所述类单胺氧化酶C类脱水酶基因分离克隆及其蛋白质制备方法,其步骤如下:
1)MaoC基因分离克隆的具体步骤:
A:采用CTAB法提取辣椒疫霉菌基因组DNA,备用;
B:根据已公布的辣椒疫霉全基因组草图序列,经生物信息学分析获得目的基因MaoC的序列,设计特异引物,其序列如Seq ID No:3及Seq ID No:4所示,经PCR克隆得到MaoC基因全长序列;
2)制备蛋白质的具体步骤:
A:将MaoC基因原核表达载体构建,目的基因克隆至pET28a(+)表达载体中;
B:将上述重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导表达。;
C:表达产物酶活性检测、SDS-GAGE分析及纯化。
3.类单胺氧化酶C类脱水酶基因,应用于制备生物降解物质聚羟基脂肪酸酯。
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