[发明专利]一种胰岛素和C肽双标记测定试剂盒

权利要求书

1.一种利用双标记时间分辨免疫荧光分析技术同时进行胰岛素和C肽定量测定的试剂盒，包括：校准品干血片、包被反应板、标记物、分析缓冲液、25x洗液和增强液，其中标记物含铕标记抗C肽抗体和钐标记胰岛素抗体两种标记物，其特征在于铕标记抗C肽抗体和钐标记胰岛素抗体浓度分别为25μg/mL和50μg/mL，溶解基质组分为pH7.8的50mmol/lTris-HCl、3％BSA、0.1％Proclin300、3％海藻糖和0.84％NaCl。

2.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于铕标记抗C肽抗体和钐标记胰岛素抗体的制备步骤分别为：

1)抗体纯化和浓缩：选择市售的抗C肽单克隆抗体和抗胰岛素单克隆抗体，将1mg抗C肽单克隆抗体和1mg抗胰岛素单克隆抗体加入pH 9.0的50mmol/L Na₂CO₃ 0.5ml，混匀后，用市售的带有滤膜的G-50离心管10000rpm离心5min，再用pH 9.0的50mmol/LNa₂CO₃0.5ml重复洗涤6次，倒转G-50离心管，1500rpm离心2min收集抗体，体积控制在150μl-250μl；

2)抗体标记：将纯化的C肽抗体加入0.2mg Eu³⁺标记试剂，纯化的胰岛素抗体加入0.5mgSm³⁺标记试剂，充分混匀，25℃振荡过夜；

3)上样与洗脱：用规格为1×30cm的Sephadex G-50层析柱分离纯化，含0.9％NaCl的50mmol/l Tris-HCl洗脱，按1ml/管收集流出液，逐管测量A280nm，合并峰管，测蛋白含量；

4)稀释标记物：并管后的铕和钐标记物，按1∶100的比例进行稀释；

5)分装标记物：分装体积为1.0ml/瓶，真空冷冻干燥；

6)保存：冻干后在2℃-8℃条件下保存。

3.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于分析缓冲液组分为pH7.8的50mmol/LTris-HCl、1.5％PEG6000、0.2％BSA、0.1％Proclin300、0.02％牛IgG、0.1％Tween 20和0.84％NaCl。

4.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于校准品干血片由胰岛素和C肽溶解在校准品基质中，并滴制在Whatman903^#滤纸上，其中校准品干血片根据胰岛素和C肽浓度不同分别编号A-E，编号为A-E的校准品干血片加入胰岛素和C肽的浓度分别为：

校准品基质由脱纤维绵羊全血，使用生理盐水洗涤6次后，并采用生理盐水调整红细胞压积至0.55，轻轻混匀制备而成。

5.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于试剂盒使用的标本类型为滤纸干血片。