[发明专利]一种乳酸菌细胞壁肽聚糖微胶囊的制备方法

权利要求书

1.一种乳酸菌细胞壁肽聚糖微胶囊的制备方法，其特征在于乳酸菌细胞壁肽聚糖微胶囊的制备方法按以下步骤实现：一、将L-乳酸菌接种到MRS培养基中，在37℃下富集培养48h，得菌种培养液，经离心、洗涤后收集L-乳酸菌菌体；二、取20g L-乳酸菌菌体悬浮于100mL浓度为100g/L的三氯乙酸溶液中，在75℃水浴中处理25min，冷却至室温后离心并收集沉淀，然后用蒸馏水洗涤沉淀至pH值呈中性；三、按固液比1∶5将沉淀加入到胰蛋白酶磷酸缓冲液中，在37℃、转速120r/min的条件下震荡12h，以1500r/min的转速离心5min弃取沉淀，然后取上清液以8000r/min的转速离心15min，得去蛋白的细胞壁沉淀，用蒸馏水洗涤3次后加入氯仿甲醇混合溶液浸泡去蛋白的细胞壁沉淀6h，再以8000r/min的转速离心15min，所得沉淀用无水乙醇洗涤脱水，自然干燥后放入研钵中研磨成粉末，得肽聚糖提取物粉末；四、将50mg肽聚糖提取物粉末和5ml蒸馏水混合后超声处理10min，得悬浊液；五、将50mg壳聚糖和5ml质量浓度为2％的醋酸溶液混合，然后加入悬浊液，搅拌后静止消泡，再滴加到60ml液体石蜡中并磁力搅拌，乳化1h后加入0.15ml质量浓度为50％的戊二醛溶液，交联3h，得反应液；六、反应液以4000r/min的转速离心10min，弃去上清得黄色沉淀，然后依次用石油醚清洗3次、异丙醇清洗2次、蒸馏水清洗1次，即完成乳酸菌细胞壁肽聚糖微胶囊的制备。

2.根据权利要求1所述的一种乳酸菌细胞壁肽聚糖微胶囊的制备方法，其特征在于步骤一中MRS培养基由10g的牛肉蛋白粉、10g的鱼肉汁、5g的酵母浸出粉、20g的葡萄糖、5g的醋酸钠、2g的柠檬酸二铵、0.1g的吐温80、0.58g的硫酸镁和0.28g的硫酸锰加入蒸馏水并定容至1000mL组成，121℃灭菌15min，调节pH值为6.2～6.4。

3.根据权利要求1或2所述的一种乳酸菌细胞壁肽聚糖微胶囊的制备方法，其特征在于步骤一中离心采用4000r/min的转速离心15min。

4.根据权利要求3所述的一种乳酸菌细胞壁肽聚糖微胶囊的制备方法，其特征在于步骤一中洗涤采用pH值为6.8的PBS缓冲液洗涤菌体至菌体呈白色。

5.根据权利要求4所述的一种乳酸菌细胞壁肽聚糖微胶囊的制备方法，其特征在于步骤二中离心采用8000r/min的转速离心10min。

6.根据权利要求5所述的一种乳酸菌细胞壁肽聚糖微胶囊的制备方法，其特征在于步骤三中氯仿甲醇混合溶液由氯仿和甲醇按1∶2的体积比混合而成。

7.根据权利要求6所述的一种乳酸菌细胞壁肽聚糖微胶囊的制备方法，其特征在于步骤三中胰蛋白酶磷酸缓冲液由和0.9ml浓度为3mg/ml的胰蛋白酶和0.1ml的PBS缓冲液组成，pH值为8.0。

8.根据权利要求7所述的一种乳酸菌细胞壁肽聚糖微胶囊的制备方法，其特征在于步骤四中超声处理的功率为800W。

9.根据权利要求8所述的一种乳酸菌细胞壁肽聚糖微胶囊的制备方法，其特征在于步骤五60ml液体石蜡中含有2.4g司班80。