[发明专利]一种复合微生物添加剂及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种复合微生物添加剂，其特征在于：采用 啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) ATCC No.9763，产朊假丝酵母（Candida utilis）ATCC No.22023，沼泽红假单胞菌(Rhodopseudom onas Palustris)ATCCNo.33872，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ATCC No.8014，嗜酸乳杆菌(Leatobacillus acidophilus) ATCC No.11073，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）ATCC No.6633制备菌种；所述菌种的质量百分比如下：啤酒酵母30~60%，产朊假丝酵母5~30%，沼泽红假单胞菌5~30%，植物乳杆菌5~30%，嗜酸乳杆菌5~40%，枯草芽孢杆菌5~25%。

2.根据权利要求1所述的一种复合微生物添加剂的制备方法，其特征在于：所述复合微生物添加剂的制备步骤如下：

1.接种：将所述各菌种接于斜面培养基上。啤酒酵母培养温度为30℃，培养时间为6～48h；产朊假丝酵母培养温度25～30℃，培养时间为6～48h；沼泽红假单胞菌培养温度为25～30℃，培养时间为6～48h；植物乳杆菌培养温度25～30℃，培养时间为6～48h；嗜酸乳杆菌培养温度为27～37℃，培养时间为6～48h；枯草芽孢杆菌培养温度为27～37℃，培养时间为6～48h； 

2.一级菌种培养：将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的50mL锥形瓶中，培养基pH为6.0～8.0，锥形瓶放入摇床振荡，温度为30℃，振荡24～48h；采用血球计数板计数，菌液中菌种数量分别达到10⁸个/mL；

3.二级发酵：将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的1000mL锥形瓶中，培养基pH3~6，放入摇床振荡，温度为30℃，振荡48～72h；使菌种数量分别达到10⁸个/mL以上，将各菌种按所述菌种的质量百分比混合；

4.三级发酵：将混合后的菌液接种于盛有复合菌剂培养基的发酵罐中，复合菌剂培养基pH3~6，接种量为1～5%，30℃下培养4～7天，使发酵液中菌数达到8～10×10⁸个/mL，即得到所述微生物复合菌剂。

3.根据权利要求2所述的一种复合微生物添加剂的制备方法，其特征在于：所述液体培养基配方为：

1.啤酒酵母采用的液体培养基配方为：酪蛋白胨15g/L，酵母25g/L，葡萄糖30 g/L，KH₂PO₄ 2.4g/L，K₂HPO₄·3H₂O 16.34 g/L；

2.产阮假丝酵母采用的液体培养基配方为：稀释去除啤酒花的麦芽汁至浓度为12Brix，琼脂15 g，高压灭菌30分钟；

3.沼泽红假单胞菌采用的液体培养基配方为：氯化铵1.5g，磷酸二氢钾1.5g，七水硫酸镁0.8g，氯化钠4.0g，碳酸氢钠1.8g，氯化钙0.01g，VB0.1g，酵母粉1.0 g，乙酸钠4.0g，微量元素1.0mL/L包括（六水氯化铁5.0g，七水硫酸锌1.0g，五水硫酸铜0.05g，六水氯化钴0.5g，硼酸1.0g，四水氯化锰0.5g），添加乙酸调节pH，水适量；

4.植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌采用的液体培养基配方为：乳酪蛋白胨 10g、蛋白胨10g、酵母膏 5g、葡萄糖5g 、吐温80 1g、K₂HPO₄2g、醋酸钠 5g、柠檬酸二胺 2g、MgSO₄·7H₂O 0.2g、MnSO₄·H₂O 0.05g、蒸馏水1000ml； 

5.枯草芽孢杆菌采用的液体培养基配方为：牛肉膏 5g、蛋白胨10g、Nacl 3g、pH 7.0。