[发明专利]一种复合微生物添加剂及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种复合微生物添加剂808及其制备方法与应用，属于植物生物调节剂在农作物种植中应用的生物材料技术领域。

背景技术

饲料添加剂最初的定义是饲料补充物，以添加维生素和无机盐等成分填补饲料中营养成分的不足，平衡饲料的营养，并获得良好的饲养效果。

随着畜禽集约化死样的进一步发展和畜禽饲养密度的增加，各种畜禽疾病的发生越来越频繁，多数养殖的畜禽都处于亚健康状态。曾经广泛使用的治疗药物不仅使病原微生物产生了严重的抗药性，还引起畜产品药物残留的严重问题，发展下去势必影响人类的健康。

微生态制剂在这种历史背景下应运而生，为畜牧业的持续发展提供了一条有效、可靠的途径。采用生物工程技术复合发酵，利用多种微生物相互作用，形成一个生态平衡的系统。

发明内容

本发明所要解决的问题是采用多种菌种制备复合微生物菌剂，利用该复合微生物菌剂制成饲料级复合微生物添加剂应用在畜禽养殖业。进入畜禽动物体内，形成优势种群，参与肠道微生物的平衡，提高动物的饲料利用率和生长速度，提高动物机体非特异性免疫功能，防病抗病。

本发明的技术解决方案如下：一种复合微生物添加剂808采用 啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) ATCC No.9763，产朊假丝酵母（Candida utilis）ATCC No.22023，沼泽红假单胞菌(Rhodopseudom onas Palustris)ATCCNo.33872，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ATCC No.8014，嗜酸乳杆菌(Leatobacillus acidophilus) ATCC No.11073，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）ATCC No.6633制备菌种；所述菌种的质量百分比如下：啤酒酵母30~60%，产朊假丝酵母5~30%，沼泽红假单胞菌5~30%，植物乳杆菌5~30%，嗜酸乳杆菌5~40%，枯草芽孢杆菌5~25%。

所述的一种复合微生物添加剂808的制备步骤如下：

1.接种：将所述各菌种接于斜面培养基上。啤酒酵母培养温度为30℃，培养时间为6～48h；产朊假丝酵母培养温度25～30℃，培养时间为6～48h；沼泽红假单胞菌培养温度为25～30℃，培养时间为6～48h；植物乳杆菌培养温度25～30℃，培养时间为6～48h；嗜酸乳杆菌培养温度为27～37℃，培养时间为6～48h；枯草芽孢杆菌培养温度为27～37℃，培养时间为6～48h；

2.一级菌种培养：将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的50mL锥形瓶中，培养基pH为6.0～8.0，锥形瓶放入摇床振荡，温度为30℃，振荡24～48h；采用血球计数板计数，菌液中菌种数量分别达到10⁸个/mL；

3.二级发酵：将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的1000mL锥形瓶中，培养基pH3~6，放入摇床振荡，温度为30℃，振荡48～72h；使菌种数量分别达到10⁸个/mL以上，将各菌种按所述菌种的质量百分比混合；

4.三级发酵：将混合后的菌液接种于盛有复合菌剂培养基的发酵罐中，复合菌剂培养基pH3~6，接种量为1～5%，30℃下培养4～7天，使发酵液中菌数达到8～10×10⁸个/mL，即得到所述微生物复合菌剂。

所述液体培养基配方为：

1.啤酒酵母采用的液体培养基配方为：酪蛋白胨15g/L，酵母25g/L，葡萄糖30 g/L，KH₂PO₄ 2.4g/L，K₂HPO₄·3H₂O 16.34 g/L；

2.产阮假丝酵母采用的液体培养基配方为：稀释去除啤酒花的麦芽汁至浓度为12Brix，琼脂15 g，高压灭菌30分钟；

3.沼泽红假单胞菌采用的液体培养基配方为：氯化铵1.5g，磷酸二氢钾1.5g，七水硫酸镁0.8g，氯化钠4.0g，碳酸氢钠1.8g，氯化钙0.01g，VB0.1g，酵母粉1.0 g，乙酸钠4.0g，微量元素1.0mL/L包括（六水氯化铁5.0g，七水硫酸锌1.0g，五水硫酸铜0.05g，六水氯化

钴0.5g，硼酸1.0g，四水氯化锰0.5g），添加乙酸调节pH，水适量；

 4.植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌采用的液体培养基配方为：乳酪蛋白胨 10g、蛋白胨10g、