[发明专利]一种适于培养CHO细胞的培养基及其培养工艺

权利要求书

1.一种适于CHO细胞悬浮无血清培养的培养基，其特征在于包含下列组分：

(1)21.4g/L C6614培养基

(2)0.05～6.0mM/L谷氨酰胺

(3)0.1～100mg/L胰岛素

(4)0.1～100mM/L柠檬酸铁

调节pH为6.9-7.4。

2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于含有下列组分：

(1)21.4g/LC6614培养基

(2)4～6mM/L谷氨酰胺

(3)5.0mg/L胰岛素

(4)1.5mM/L柠檬酸铁

调节pH为7.0。

3.根据权利要求1或2所述的培养基，其特征在于还含有脂类，其中所述脂类优选为lipid。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的培养基，其特征在于后期培养中所用的流加培养基为含有EX-cell 302的培养基。

5.根据权利要求4所述的培养基，其特征在于所述的流加培养基为浓缩的EX-cell 302培养基，其中含有63.6g/L 302培养基、2-100g/L大豆水解蛋白、5-10mg/L胰岛素。

6.根据权利要求5所述的培养基，其特征在于所述的浓缩的EX-cell 302培养基的成分为63.6g/L 302培养基、20g/L大豆水解蛋白、5mg/L胰岛素。

7.根据权利要求1或2所述的培养基，其特征在于由以下方法制备：C6614干粉与超纯水混合搅拌后，加入谷氨酰胺、柠檬酸铁水溶液，再加入碳酸氢钠调节pH值为6.9-7.4，60分钟后再加入胰岛素，补充超纯水，10分钟后取样测定生化参数，过滤除菌。

8.一种生产重组蛋白类药物的CHO细胞培养工艺，其特征在于：

(1)控制生物反应器的参数溶氧控制为40，温度控制为37℃，搅拌速度为40rpm，气体流量为100mL/min；

(2)采用权利要求1-3中任一培养基为基础培养基，浓缩EX-cell 302培养基为流加培养基；

(3)在培养后期采用流加和降温培养工艺并降低pH，将温度控制在33.0～36.5℃，控制pH在6.0～7.1；

(4)流加培养过程中，保持葡萄糖浓度为2～3g/L，谷氨酰胺浓度为2～3mM/L。

9.根据权利要求8所述的CHO细胞培养工艺，其特征在于：

(1)控制生物反应器的参数溶氧控制为40，温度控制为37℃，搅拌速度为40rpm，气体流量为100mL/min；

(2)采用权利要求2中的培养基为基础培养基，权利要求6中的浓缩EX-cell 302培养基为流加培养基；

(3)在培养后期采用流加和降温培养工艺并降低pH，将温度控制在34-36.5℃，控制pH在6.9-7.0；

(4)流加培养过程中，保持葡萄糖浓度为2～3g/L，谷氨酰胺浓度为2～3mM/L。