[发明专利]转基因兔的生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及家畜生产的基因工程技术，尤其是涉及一种转基因兔的生产方法。

背景技术

不饱和脂肪酸是细胞的基本组分之一，其摄入数量和类型直接影响到消费人群的健康，有报道称：高水平摄入n-6多聚不饱和脂肪酸(n-6 PUFAs)，尤其是同时伴有低水平摄入n-3多聚不饱和脂肪酸(n-3 PUFAs)，会明显增加患乳腺癌、大肠癌和前列腺癌的危险性。目前，大部分西方国家人民体内n-6/n-3 PUFAs的比例超过18∶1，由此引发多种细胞和机体功能障碍甚至癌症。这主要是由于哺乳动物体内缺乏合成n-3 PUFAs前体的酶，也缺乏能够将n-6 PUFAs转化为n-3 PUFAs的酶。因此，增加n-3 PUFAs的摄入量对于人类健康具有极其重要的意义。

家兔是一种用途广泛的经济性动物，目前国内外市场兔肉需求量不断加大。一方面因为家兔具有繁殖速度快、生产周期短等优点；另一方面，兔肉蛋白质含量显著高于猪肉、牛肉和羊肉，同时其脂肪含量低且多为不饱和脂肪酸。因此，大力发展养兔业不仅可以增加农民收入，而且还能提高人们的健康和生活水平。

近年研究发现线虫Caenorhabditis elegans(C.elegans)的n-3脂肪酸去饱和酶能够以十八碳或二十碳的n-6 PUFAs为底物分别合成相应的n-3 PUFAs。此外，线虫C.elegans的n-3去饱和酶基因(Fat1)被转入哺乳动物细胞以及小鼠能使其n-3 PUFAs(从十八碳到二十二碳)的含量显著提高。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种操作简便、成本低廉且快速的转基因兔的生产方法，以改善家兔的肉质提高兔肉中不饱和脂肪酸含量，为人们的健康生活提供富含n-3PUFAs的肉类食品。

为解决上述技术问题本发明采用如下技术方案：转基因兔的生产方法，该方法包括以下步骤：

(1)克隆Fat1基因和PGK1调控元件；

(2)将步骤(1)所得Fat1基因和PGK1调控元件用来构建Fat1基因真核表达载体；

(3)将步骤(2)所得Fat1基因真核表达载体注射到雄性兔睾丸中；

(4)对步骤(3)所得雄性兔的精子进行PCR检测，选择检测结果为阳性的雄性兔与雌性兔交配，所产仔兔经鉴定获得F1代转Fat1基因的转基因兔。

Fat1基因为序列表SEQ.ID.No.1的碱基序列。

克隆Fat1基因中设计合成的特异引物为：

P1：5′CTTCCGACATTGATTATTGAC3′和P2：5′GATCCACATGATAAGATAC3′。

PGK1调控元件为序列表SEQ.ID.No.2的碱基序列。

Fat1基因真核表达载体为pMD-PGK1-Fat1-CMV-EGFP。

注射以DMSO或脂质体为转导试剂配制注射液。

本发明采用Fat1基因和PGK1调控元件构建了Fat1基因真核表达载体，通过睾丸注射向雄性家兔的精原细胞中导入Fat1外源基因，然后由PCR检测阳性的雄兔与正常雌兔交配，所产F1代仔兔即是整合Fat1外源基因的转基因兔。因为Fat1基因表达的n-3去饱和酶能使哺乳动物体内十八碳或二十碳的n-6 PUFAs转化成相应的n-3 PUFAs，所以本发明获得的转Fat1基因兔，其兔肉中不饱和脂肪酸的组成和含量应有明显改善。

附图说明

图1是转Fat1基因组成型真核表达载体构建示意图。

图2是Fat1基因真核表达载体的物理图谱。

具体实施方式

1.调控元件的克隆与验证

应用oligo6.0软件设计一对特异性扩增引物：

P1：5’GAATTC AATGTAGGAGAGTTCCAGTGGC 3’(5′含KpnI位点)