[发明专利]一种腺病毒-甲病毒杂合病毒的制备及其应用

权利要求书

1.一种腺病毒-甲病毒杂合病毒，其特征在于具备重组腺病毒Ad5/F11p的颗粒特征，能靶向感染造血细胞；携带的甲病毒复制子相关序列由造血细胞特异性启动子CD11Ap、甲病毒非结构蛋白nsP1～nsP4、目的基因GFP和SV40 polyA顺序连接而成，能有效介导目的基因的高效表达。

2.根据权利要求1所述的杂合病毒，其特征在于其具有F5/11p的杂合纤维顶球。

3.根据权利要求1所述的杂合病毒，其特征在于目的基因GFP位于nsP1～nsP4序列的下游。

4.根据权利要求1所述的杂合病毒，其特征在于目的基因GFP可在甲病毒复制子载体构建中被方便替换。

5.根据权利要求1所述的杂合病毒，其特征在于杂合病毒质粒E4区部分序列缺失，仅保留orf3区。

6.根据权利要求5所述杂合病毒，其特征在于病毒的拯救使用杂合病毒质粒与辅助病毒质粒的共转染。

7.权利要求1所述杂合病毒的制备方法，其特征在于以下步骤：

(1)以stratagene公司Adeasy系统为基础，将CD11Ap、SV40 polyA和GFP克隆到甲病毒复制子载体中，获得pSFV-cd11a-polyA-GFP；

(2)将甲病毒复制子相关序列克隆到穿梭质粒，获得杂合穿梭质粒pShuttle-SFV-GFP；

(3)对骨架质粒pAd5/F11p的E4区改构获得pAd5/F11pDE4orf3；

(4)杂合穿梭质粒和骨架质粒于BJ5183中同源重组获得杂合病毒质粒pAd5/F11p-SFV-GFP；

(5)将其与辅助病毒质粒pAd5/F11p-HV共转染293Cre4细胞，拯救得到杂合病毒。

8.根据权利要求1～7任一项所述的杂合病毒在造血细胞基因修饰和造血靶向基因治疗药物制备中的应用。

9.根据权利要求1～7任一项所述的杂合病毒在制备针对恶性血液肿瘤的基因治疗药物中的应用。