[发明专利]基于抗重组UL51蛋白抗体的鸭瘟病毒抗原捕获ELISA法

权利要求书

1.基于抗重组UL51蛋白抗体的鸭瘟病毒抗原捕获ELISA法，其特征在于，具体步骤为：

a固相抗体的制备：将浓度大于或等于12.5μg/mL的A抗重组UL51蛋白抗体IgG与固相载体连结，用封闭液封闭，洗涤去除未结合的抗体及杂质，得固相抗体；

b加待测样品：将待测样品与步骤a所得固相抗体保温反应并洗涤去杂质，得抗原-A抗复合物；

c与B抗重组UL51蛋白抗体IgG反应：将浓度大于或等于25μg/mL的B抗重组UL51蛋白抗体IgG与步骤b所得抗原-A抗复合物保温反应并洗涤去杂质，得抗原-A抗-B抗复合物；

d与酶标抗体反应：将酶标抗体作体积小于或等于2000倍的稀释，得酶标抗体稀释液，将酶标抗体稀释液与步骤c所得抗原-A抗-B抗复合物保温反应，得抗原-A抗-B抗复合物-酶标抗体复合物；

e显色：在步骤d所得酶标抗体复合物中加入色原底物避光显色后，加入终止液终止反应得显色样品液；

f检测及结果判定：将步骤e所得显色样品液用酶标仪测定OD_450nm值，当OD_450nm值＞0.265时判为阳性，当OD_450nm≤0.265时判为阴性。

步骤a所述的A抗重组UL51蛋白抗体IgG中A为免疫学研究中常规实验动物中除鸭外的任一种动物，步骤c所述的B抗重组UL51蛋白抗体IgG中B为免疫学研究中常规实验动物中除A外的任一种动物，步骤d中所述酶标抗体为HRP标记的免疫学研究中常规实验动物中除A和B外的动物抗B IgG。

2.根据权利要求1所述的基于抗重组UL51蛋白抗体的鸭瘟病毒抗原捕获ELISA法，其特征在于，具体步骤为：

a固相抗体的制备：将浓度等于12.5μg/mL的A抗重组UL51蛋白抗体IgG与固相载体连结，用封闭液封闭，洗涤去除未结合的抗体及杂质，得固相抗体；

b加待测样品：将待测样品与步骤a所得固相抗体保温反应并洗涤去杂质，得抗原-A抗复合物；

c与B抗重组UL51蛋白抗体IgG反应：将浓度等于25μg/mL的B抗重组UL51蛋白抗体IgG与步骤b所得抗原-A抗复合物保温反应并洗涤去杂质，得抗原-A抗-B抗复合物；

d与酶标抗体反应：将酶标抗体作体积等于2000倍的稀释，得酶标抗体稀释液，将酶标抗体稀释液与步骤c所得抗原-A抗-B抗复合物保温反应，得抗原-A抗-B抗复合物-酶标抗体复合物；

e显色：在步骤d所得酶标抗体复合物中加入色原底物避光显色后，加入终止液终止反应得显色样品液；

f检测及结果判定：将步骤e所得显色样品液用酶标仪测定OD_450nm值，当OD_450nm值＞0.265时判为阳性，当OD_450nm≤0.265时判为阴性。

3.根据权利要求1或2所述的基于抗重组UL51蛋白抗体的鸭瘟病毒抗原捕获ELISA法，其特征在于：步骤a中所述A抗重组UL51蛋白抗体IgG、步骤b中所述待测样品、步骤c中所述B抗重组UL51蛋白抗体IgG及步骤d中酶标抗体稀释液的加入量为等体积。

4.根据权利要求3所述的基于抗重组UL51蛋白抗体的鸭瘟病毒抗原捕获ELISA法，其特征在于：步骤a中所述A抗重组UL51蛋白抗体IgG、步骤b中所述待测样品、步骤c中所述B抗重组UL51蛋白抗体IgG及步骤d中酶标抗体稀释液的加入量为100～200μl。

5.根据权利要求1或2所述的基于抗重组UL51蛋白抗体的鸭瘟病毒抗原捕获ELISA法，其特征在于：步骤a中所述A抗重组UL51蛋白抗体IgG为鼠抗重组UL51蛋白抗体IgG，步骤c中所述B抗重组UL51蛋白抗体IgG为兔抗重组UL51蛋白抗体IgG，步骤d中所述酶标抗体为羊抗兔IgG-HRP。

6.根据权利要求1所述的基于抗重组UL51蛋白抗体的鸭瘟病毒抗原捕获ELISA法，其特征在于：步骤d中所述色原底物为四甲基联苯胺。

7.根据权利要求1所述的基于抗重组UL51蛋白抗体的鸭瘟病毒抗原捕获ELISA法，其特征在于：步骤e中避光显色的时间为20分钟。

8.根据权利要求1所述的基于抗重组UL51蛋白抗体的鸭瘟病毒抗原捕获ELISA法，其特征在于：所述方法还包括空白对照实验和阴性对照实验。