[发明专利]基于重组UL51蛋白的鸭瘟病毒抗体的检测方法有效
| 申请号： | 201010299560.3 | 申请日： | 2010-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN102004150A | 公开（公告）日： | 2011-04-06 |
| 发明（设计）人： | 程安春;汪铭书;沈婵娟;陈孝跃 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学实验动物工程技术中心 |
| 主分类号： | G01N33/569 | 分类号： | G01N33/569;C12N15/38;C12N15/70;C07K14/03 |
| 代理公司： | 北京同恒源知识产权代理有限公司 11275 | 代理人： | 赵荣之 |
| 地址： | 625014 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 重组 ul51 蛋白 瘟病 抗体 检测 方法 | ||
1.基于重组UL51蛋白的鸭瘟病毒抗体的检测方法，其特征在于，具体步骤为：
a固相抗原的制备：将包被浓度大于或等于2.5μg/100μL的重组UL51蛋白液与固相载体连接，用封闭液封闭，洗涤去除未结合的抗原及杂质，得固相抗原；
b一抗结合：将待检血清作体积小于或等于200倍的稀释，得稀释血清，即一抗，通过保温反应使所述稀释血清与步骤a所得固相抗原结合形成固相抗原抗体复合物，洗涤去除固相载体上杂质；
c二抗结合：将酶标二抗作体积小于或等于2000倍的稀释，得酶标二抗稀释液，将所述酶标二抗稀释液与步骤b所得固相抗原抗体复合物结合，得抗原-抗体-二抗复合物；
d显色：在步骤c所得抗原-抗体-二抗复合物中加入色原底物避光显色后，加入终止液终止反应得显色样品液；
e检测及结果判定：将步骤d所得显色样品液用酶标仪测定OD450nm值，当OD450nm值＞0.216时判为阳性，当OD450nm≤0.216时判为阴性。
2.根据权利要求1所述的基于重组UL51蛋白的鸭瘟病毒抗的体检测方法，其特征在于，具体步骤为：
a固相抗原的制备：将包被浓度等于2.5μg/100μL的重组UL51蛋白液与固相载体连接，用封闭液封闭，洗涤去除未结合的抗原及杂质，得固相抗原；
b一抗结合：将待检血清作等于200倍的稀释，得稀释血清，即一抗，通过保温反应使所述稀释血清与所述固相抗原结合形成固相抗原抗体复合物，洗涤去除固相载体上杂质；
c二抗结合：将酶标二抗作等于2000倍的稀释，得酶标二抗稀释液，将所述酶标二抗稀释液与所述固相抗原抗体复合物结合，得抗原-抗体-二抗复合物；
d显色：在步骤c所得抗原-抗体-二抗复合物加入色原底物避光显色后，加入终止液终止反应得显色样品液；
e检测并判定：将步骤d所述显色样品液用酶标仪测OD450nm值，所述OD450nm值＞0.216为阳性，所述OD450nm≤0.216则为阴性。
3.根据权利要求1或2所述的基于重组UL51蛋白的鸭瘟病毒抗体的检测方法，其特征在于：步骤a中所述重组UL51蛋白液、步骤b中所述稀释血清及步骤c中所述酶标二抗稀释液的加入量为等体积且大于或等于100μL。
4.根据权利要求1或2所述的基于重组UL51蛋白的鸭瘟病毒抗体的检测方法，其特征在于：步骤c中所述酶标二抗为羊抗鸭IgG-HRP。
5.根据权利要求1或2所述的基于重组UL51蛋白的鸭瘟病毒抗体的检测方法，其特征在于：步骤a中所述的封闭液为体积百分浓度为1％的牛血清白蛋白溶液。
6.根据根据权利要求1或2所述的基于重组UL51蛋白的鸭瘟病毒抗体的检测方法，其特征在于：步骤d中所述色原底物为四甲基联苯胺。
7.根据权利要求1或2所述的基于重组UL51蛋白的鸭瘟病毒抗体的检测方法，其特征在于：步骤d中避光显色的时间为20分钟。
8.根据权利要求1或2所述的基于重组UL51蛋白的鸭瘟病毒抗体的检测方法，其特征在于：所述方法还包括空白对照实验和阴性对照实验。
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