[发明专利]ppGalNAc-T20抗原及其多克隆抗体的制备方法

权利要求书

1.一种ppGalNAc-T20抗原，其特征在于，该抗原为蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

2.一种编码权利要求1所述的ppGalNAc-T20抗原的核酸，其特征在于，该核酸的碱基序列如SEQ ID NO：1所示。

3.一种如权利要求1所述的ppGalNAc-T20抗原的多克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，以氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的蛋白质为抗原，采用常规多克隆抗体制备方法制备抗血清；

步骤二，纯化抗血清，即得。

4.一种如权利要求1所述的ppGalNAc-T20抗原的多克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，克隆如SEQ ID NO：1所示的核酸片段；

步骤二，利用步骤一所得核酸片段构建重组质粒，转化大肠杆菌，培养，诱导，裂解，纯化，得蛋白质；

步骤三，以步骤二所得蛋白质为抗原，采用常规多克隆抗体制备方法制备抗血清，纯化抗血清，即得。

5.根据权利要求4所述的ppGalNAc-T20抗原的多克隆抗体的制备方法，其特征是，步骤一中，所述克隆，所用引物对具体为如SEQ ID NO：3所示的上游引物和SEQ ID NO：4所示的下游引物。

6.根据权利要求4所述的ppGalNAc-T20抗原的多克隆抗体的制备方法，其特征是，步骤二中，所述大肠杆菌为大肠杆菌BL21(DE3)。

7.根据权利要求4所述的ppGalNAc-T20抗原的多克隆抗体的制备方法，其特征是，步骤二中，所述重组质粒使用的质粒为pGEX-5X-1。

8.根据权利要求4所述的ppGalNAc-T20抗原的多克隆抗体的制备方法，其特征是，步骤二中，筛选所述重组质粒的过程为：将构建的重组质粒转化大肠杆菌DH5α中，使用含有100μg/ml氨苄青霉素的LB平板，37℃下培养12h，挑取单菌落后摇菌，提取质粒并测序，测序正确的即为所需重组质粒。

9.根据权利要求4所述的ppGalNAc-T20抗原的多克隆抗体的制备方法，其特征是，步骤二中，所述培养具体为，1L培养基的组成为：蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10g，余量为水；培养温度为37℃；培养至大肠杆菌BL21(DE3)的OD值为0.8～1.2。

10.根据权利要求4所述的ppGalNAc-T20抗原的多克隆抗体的制备方法，其特征是，步骤二中，所述诱导为：加入IPTG，使其终浓度为0.1mM～0.5mM，温度26℃下培养3h～6h。