[发明专利]一种养血清脑颗粒的HPLC指纹图谱检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种养血清脑颗粒的HPLC指纹图谱检测方法。

背景技术

养血清脑颗粒是由当归、川芎、白芍、钩藤、鸡血藤、熟地黄、决明子、夏枯草、细辛、延胡索和珍珠母11味中药，采用现代化制剂工艺技术精制而成，具有养血平肝、活血通络的作用，用于血虚肝亢所致的头痛、眩晕眼花、心烦易怒、失眠多梦等症，是受国家重点保护的中药品种。

其中当归和川芎中所共有的指标性成分阿魏酸，被研究证明具有舒张血管、升高血清白蛋白和防治脂质过氧化损伤等作用，被普遍用于防治偏头痛、冠心病和糖尿病周围神经病变等临床多发症；川芎，夏枯草和钩藤中所共有的咖啡酸被证明具有阻遏脑内MDA含量增加和SOD活性降低的功能，被用于改善学习记忆能力障碍；夏枯草中的迷迭香酸和决明子中的黄芩苷，也被分别证明具有改善肾小球高滤过状态，抑制细胞外基质增生和解除发热，抗焦虑等作用，是养血清脑颗粒中的重要有效成分。

作为多维组分复杂样品的整体性评价中药质量的有效控制手段，中药指纹图谱是目前能够为国内外广泛接受的全面评价中药质量模式的一种方法。美国FDA在植物药制品指导原则中允许申报者提供产品的色谱指纹图谱资料，德国药用植物学会、英国草药典、印度草药典以及加拿大药用及芳香植物学会也都把指纹图谱作为质量控制标准的内容之一。目前有关于养血清脑颗粒指纹图谱方面的研究在国内外尚未见报道，为了更好地控制其质量，保证临床用药的安全性和有效性，本实验采用HPLC法对其指纹图谱进行了初步研究，在方法学考察的基础上建立了养血清脑颗粒的高效液相指纹图谱，并考察制剂中共有峰在药材中的归属，为其质量控制提供了更全面的信息。

发明内容

本发明提供一种养血清脑颗粒的HPLC指纹图谱检测方法，该方法经过以下步骤：

1)养血清脑颗粒供试品溶液的制备，精密称定养血清脑颗粒用3∶1甲醇-水配制成溶液，作为制剂供试品溶液；

2)将步骤1得到的溶液注入高效液相色谱仪进行测定，分别得到它的色谱图。

本发明所述的方法，其中所用的甲醇-水的体积比为3∶1，采用超声提取。

本发明所述的方法，其中所述的检测方法中，步骤2所述的液相色谱采用Agilent Zorbax C18柱。

本发明所述的方法，其中所述的检测方法中，步骤2所述的液相色谱采用乙腈-0.5％甲酸做流动相。

本发明所述的方法，其中所述的检测方法中，步骤2所述的液相色谱条件：

色谱柱：Agilent Zorbax C18(4.6mm×250mm，5μm)色谱柱；流动相：A(0.5％甲酸)-B(乙腈)，线性梯度洗脱：0～20min，B(5％～13％)；20～49min，B(13％～30％)；49～98min，B(30％～75％)；流速为1.0mL·min^-1；柱温：40℃；检测波长：0～32min为327nm，32～98min为280nm；进样量：10μL；

本发明还提供了一种养血清脑颗粒的检测方法，包括以下步骤：

(A)取合格的养血清脑颗粒产品，按照上述方法建立养血清脑颗粒标准指纹图谱；

(B)取待检养血清脑颗粒，按照上述方法得到指纹图谱；

(C)将步骤(B)得到的指纹图谱和步骤(A)得到的标准指纹图谱进行比对，符合即为合格产品，不符合即为不合格产品。

本发明优选的测定方法包括采用以下仪器和药品：Agilent1200高效液相色谱仪及Finnigan TSQ Quantum Discovery液质联用系统；Milli-Q超纯水系统(法国Millipore公司)；甲醇、乙腈均为色谱纯；对照品阿魏酸，咖啡酸，迷迭香酸和黄芩苷均购自中国药品生物制品检定所；养血清脑颗粒由天津天士力制药股份有限公司提供。

本发明的检测方法，其色谱条件经过方法学验证，结果良好。

精密度试验 取同一供试品溶液，连续进样5次，分别对各共有峰的相对保留时间及峰面积的变化情况进行考察，结果各共有峰保留时间的RSD小于0.12％，相对峰面积的RSD小于2.11％，说明仪器的精密度较好，符合指纹图谱分析的要求。

重复性试验 取同一批样品，制备5份制剂供试品溶液，分别进样，以14号峰作为参考，考察共有峰的保留时间及相对峰面积，结果各共有峰相对保留时间的RSD小于0.27％，相对峰面积的RSD小于3.89％，说明实验方法的重复性较好，符合指纹图谱分析的要求。