[发明专利]一种rRNA嵌合启动子及含有该嵌合启动子的表达载体

权利要求书

1.一种rRNA rrnB P1嵌合启动子，其特征在于该嵌合启动子是在大肠杆菌rRNA rrnB操纵元启动子P1的上下游分别插入乳糖操纵元的两个lacO1启动子；或者在大肠杆菌rRNA操纵元启动子P1的上下游分别插入阿拉伯糖操纵元的araI1和araO2启动子，形成环状DNA结构实现对启动子P1的控制。

2.根据权利要求1所述的rRNA rrnB P1嵌合启动子，其特征在于所述的rRNA rrnB P1嵌合启动子序列为SEQ ID NO. 1。

3.根据权利要求1所述的rRNA rrnB P1嵌合启动子，其特征在于所述的rRNA rrnB P1嵌合启动子序列为SEQ ID NO. 2。

4.一种大肠杆菌诱导型表达载体，其特征在于该诱导型表达载体由载体pET29a的T7启动子被权力要求1所述的rRNA rrnB P1嵌合启动子代替所得。

5.根据权利要求4所述的大肠杆菌诱导型表达载体，其特征在于所述的诱导型表达载体由载体pET29a的T7启动子被序列为SEQ ID NO. 1的rRNA rrnB P1嵌合启动子代替所得。

6.根据权利要求4所述的大肠杆菌诱导型表达载体，其特征在于所述的诱导型表达载体由载体pET29a的T7启动子被序列为SEQ ID NO. 2的rRNA rrnB P1嵌合启动子代替所得。

7.一种β-1,4-葡聚糖内切酶基因重组表达载体，其特征在于该重组表达载体是将β-1,4-葡聚糖内切酶基因cel5G插入到权利要求4所述大肠杆菌诱导型表达载体的XhoI和NdeI位点之间所得。

8.根据权利要求7所述的重组表达载体，其特征在于该重组表达载体是将β-1,4-葡聚糖内切酶基因cel5G插入到权利要求5所述大肠杆菌诱导型表达载体的XhoI和NdeI位点之间所得。

9.根据权利要求7所述的重组表达载体，其特征在于该重组表达载体是将β-1,4-葡聚糖内切酶基因cel5G插入到权利要求6所述大肠杆菌诱导型表达载体的XhoI和NdeI位点之间所得。

10.一种利用权利要求9所述的重组表达载体表达β-1,4-葡聚糖内切酶的方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）构建调节蛋白AraC重组表达载体：以载体pET22b为出发载体，用含自身启动子的araC基因替代载体pET22b中的T7启动子得到所述的调节蛋白AraC重组表达载体；

（2）构建权利要求9所述的β-1,4-葡聚糖内切酶基因重组表达载体；

（3）利用步骤（1）和步骤（2）构建的重组表达载体共转化大肠杆菌TOP10感受态细胞，在同时含有氨苄青霉素和卡那霉素的双抗性LB平板上筛选单菌落；

（4）培养步骤（3）筛选得到的阳性菌株表达β-1,4-葡聚糖内切酶。