[发明专利]一种鸽性别鉴别方法

权利要求书

1.一种鸽性别鉴别方法，其特征在于通过比对鸽CHD基因的2550F/2718R引物扩增产物与NCBI登录的CHD基因序列（AY517718、AY517719），设计上游引物SEQ ID NO.1和下游引物SEQ ID NO.2，利用此上、下游引物，通过PCR技术从鸽羽髓细胞制备的基因组DNA模板中扩增Z和W性染色体上的CHD基因片段，经过EB染色、1%琼脂糖凝胶电泳，根据带型判断性别，出现两条带，即628bp和358bp的为雄性；出现三条带，即628bp、420bp和358bp的为雌性。

2.根据权利要求1所述的鸽性别鉴别方法，其特征在于所述的鸽Z和W性染色体的CHD基因片段扩增的PCR反应体系为：双蒸水6.05μl、25mM Mg²⁺ 1.0μl、10×Buffer 1.0μl、5mM dNTP 0.4μl、5μM所述的上、下游引物各0.5μl、Taq酶0.05μl、鸽基因组DNA模板0.5μl；PCR反应条件为：94℃ 2分钟；94℃ 30秒，50℃ 30秒，72℃ 40秒，35个循环。

3.根据权利要求1或2所述的鸽性别鉴别方法，其特征在于所述的鸽基因组DNA模板制备方法如下：（1）拨取含少量羽髓的鸽腹侧初生羽毛1根，并取0.2~5mg羽髓于离心管或PCR管中；（2）向离心管或PCR管中加入微量动物细胞基因组DNA模板制备液；（3）将所述的装有羽髓和微量动物细胞基因组DNA模板制备液的离心管或PCR管95℃保温5分钟，16℃保温5分钟；（4）向所述的离心管或PCR管中加入蛋白酶K；（5）55℃保温2小时或以上，95℃保温10分钟，16℃保温5分钟，离心上清直接用作PCR的DNA模板。

4.根据权利要求3所述的鸽性别鉴别方法，其特征在于所述的微量动物细胞基因组DNA模板制备液由A液和B液以1:3-10的体积比混合制得，其中所述的A液为Tris、(NH₄)₂SO₄、MgCl₂的混合溶液，三种试剂终浓度均为0.1-2.0M；所述的B液为Triton和β-琉基乙醇的混合溶液，二种试剂终浓度均为0.1-2.0%。

5.根据权利要求3所述的鸽性别鉴别方法，其特征在于所述的蛋白酶K终浓度为1.0-3.0mg/ml。