[发明专利]美洲狼尾草快速繁殖方法及美洲狼尾草快速脱毒繁殖方法

权利要求书

1.一种美洲狼尾草快速繁殖方法，包括外植体的取材及灭菌、接种进行一次成苗培养、生根培养、炼苗移栽步骤，其特征在于：

(1)外植体的取材及灭菌步骤：取美洲狼尾草茎尖顶部或幼嫩心叶，作为脱毒组培用外植体；用质量浓度为75％的乙醇溶液浸泡30s后再用另一份质量浓度为75％的乙醇溶液浸泡60s，然后用无菌水冲洗3～5次，再用质量浓度为0.1％的氯化汞溶液消毒5～10min，然后用无菌水冲洗3～5次；

(2)诱导培养步骤：在无菌条件下，将消毒好的外植体切成1个顶芽或腋芽、且长度为1～2cm的茎段，接种于诱导培养基上，置于20-25℃的黑暗条件下培养5天，然后转入光照条件培养，温度为20～23℃、湿度为60％～65％、光照强度为70～80μmol cm-2s-1、每天光照12～14h的条件下培养至无菌芽生长长度为1～1.5cm；

(3)继代培养步骤：将增生的无菌芽一起转接于继代培养基中，在温度为25～28℃、湿度为70％～80％、光照强度为40～60μmol cm-2s-1、每天光照16～18h的条件下培养至无菌芽生长长度为2～5cm即为微枝苗；

(4)壮苗培养步骤：将每个微枝苗接种于壮苗培养基中，在温度为25～28℃、湿度为70％～80％、光照强度为40～60μmol cm-2s-1、每天光照16～18h的条件下培养至微枝生长长度为6～8cm；

(5)生根培养步骤：将增壮后的微枝切割成带有1个顶芽或1～2个腋芽、且长度为1～2cm的茎段，然后逐段接种于生根培养基进行生根培养；

(6)炼苗移栽步骤：将生根培养30天且根系达2-3cm的完整小苗，进行炼苗移栽。

2.根据权利要求1所述的一种美洲狼尾草快速繁殖方法，其特征在于：其中步骤(2)中诱导培养基是以改良1/2MS固体培养基为基本培养基，且还包含0.3～0.5mg/L的KT、0.03～0.05mg/L的IAA、3000-4000mg/L的卡拉胶和质量浓度为1.5～2.0％的白砂糖，培养基pH值为5.0～5.5；步骤(3)中继代培养基是以改良MS固培养基为基本培养基，且还包含0.05～0.1mg/L的6-BA、0.01～0.05mg/L的NAA和质量浓度为2.0～2.5％的蔗糖，培养基pH值为5.6～6.0；步骤(4)中壮苗培养基是以MS固培养基为基本培养基，且还包含质量浓度为2.0～2.5％的蔗糖，培养基pH值为5.6～6.0；步骤(5)中生根培养基是以改良1/4MS固培养基为基本培养基，培养基且还包含0.5-1.5mg/L的NAA，1-2.5mg/L的IBA和质量浓度为2.0～2.5％的白砂糖，培养基pH值为5.6～6.0；步骤(6)中生根基质按质量比为50％的草炭土、25％的蛭石和25％的珍珠岩组成，生根基质含水量为30％～40％。