[发明专利]美洲狼尾草快速繁殖方法及美洲狼尾草快速脱毒繁殖方法

说明书

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，更具体涉及一种美洲狼尾草组培脱毒成苗的快速繁殖的方法。 

背景技术

狼尾草为国家审定品种，具有产草量高、抗逆性强、品质好、耐刈割和全生育期无明显病虫危害的特点，是草食畜禽的优质青饲料和理想的水土保持作物。近年来，随着杂交狼尾草优质纸浆、中密度纤维板生产技术和作为生物质能源转化技术的不断完善，对杂交狼尾草的需求量正在迅速增加。但在品种大面积推广应用时，发现杂交狼尾草有一定比例的杂株，明显影响杂种优势的发挥及利用，究其原因与纯度有关。狼尾草常遭受病毒侵害，使品质变劣，产量下降，同时也加速了品种退化。有关美洲狼尾草技术快速脱毒繁殖技术尚未见正式报道。 

组织培养是一种高效的繁殖技术，采用幼嫩心叶或茎尖分生组织培养，也是获得无病种苗的有效途径。传统的美洲狼尾草组培快繁方法，愈伤组织诱导及分化的继代次数多，变异率较高，操作繁琐，污染机率大；腋芽培养和茎尖生长锥培养可有效地降低变异率，但需经历小苗与丛生苗诱导、增殖培养和生根培养等多次继代。上述两条途径通常要对材料进行至少几个月的培养，才可分化出苗，耗时长，效率低。因此，迫切需要技术方法上的改进革新，以节约资源消耗，提高美洲狼尾草组培效率，为真正实现GAP栽培和规模化生产提供技术平台，具有较大的应用前景 

发明内容

有鉴于此，本发明所要解决的技术问题是：针对现有技术中狼尾草常遭受病害侵害，使品质变劣，产量下降，品种退化的缺点，提供一种能大量、快速繁殖美洲狼尾草，又能脱除所带病毒并经特异检测，以确保无毒脱毒、组培与检测的配套方法。使美洲狼尾草实现从幼嫩心叶和茎尖诱导愈伤组织到分化成完整或半完整的小苗，达到快速高效，操作简化，降低变异率，节约成本的目的，为大量生产美洲狼尾草脱毒组培苗奠定良好的基础。 

为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案来实现的： 

一种美洲狼尾草快速繁殖方法，包括外植体的取材及灭菌、接种进行一次成苗培养、生根培养、炼苗移栽步骤，其特征在于： 

(1)外植体的取材及灭菌步骤：取美洲狼尾草茎尖顶部或幼嫩心叶，作为脱毒组培用外植体；用质量浓度为75％的乙醇溶液浸泡30s后再用另一份质量浓度为75％的乙醇溶液浸泡60s，然后用无菌水冲洗3～5次，再用质量浓度为0.1％的氯化汞溶液消毒5～10min，然后用无菌水冲洗3～5次； 

(2)诱导培养步骤：在无菌条件下，将消毒好的外植体切成1个顶芽或腋芽、且长度为1～2cm的茎段，接种于诱导培养基上，置于20-25℃的黑暗条件下培养5天，然后转入光照条件培养，温度为20～23℃、湿度为60％～65％、光照强度为70～80μmol cm-2s-1、每天光照12～14h的条件下培养至无菌芽生长长度为1～1.5cm； 

(3)继代培养步骤：将增生的无菌芽一起转接于继代培养基中，在温度为25～28℃、湿度为70％～80％、光照强度为40～60μmol cm-2s-1、每天光照16～18h的条件下培养至无菌芽生长长度为2～5cm即为微枝苗； 

(4)壮苗培养步骤：将每个微枝苗接种于壮苗培养基中，在温度为25～28℃、湿度为70％～80％、光照强度为40～60μmol cm-2s-1、每天光照16～18h的条件下培养至微枝生长长度为6～8cm； 

(5)生根培养步骤：将增壮后的微枝切割成带有1个顶芽或1～2个腋芽、且长度为1～2cm的茎段，然后逐段接种于生根培养基进行生根培养； 

(6)炼苗移栽步骤：将生根培养30天且根系达2-3cm的完整小苗，进行炼苗移栽。 

一种美洲狼尾草快速脱毒繁殖方法，包括外植体的取材及灭菌、接种进行一次成苗培养、生根培养、炼苗移栽等步骤，其特征在于： 

(1)外植体的取材及灭菌步骤：取美洲狼尾草茎尖顶部或幼嫩心叶，作为脱毒组培用外植体；用质量浓度为75％的乙醇溶液浸泡30s后再用另一份质量浓度为75％的乙醇溶液浸泡60s，然后用无菌水冲洗3～5次，再用质量浓度为0.1％的氯化汞溶液消毒5～10min，然后用无菌水冲洗3～5次； 

(2)诱导培养步骤：在无菌条件下，将消毒好的外植体切成1个顶芽或腋芽、且长度为1～2cm的茎段，接种于诱导培养基上，置于20-25℃的黑暗条件下培养5天，然后转入光照条件培养，温度为20～23℃、湿度为60％～65％、光照强度为70～80μmol cm-2s-1、每天光照12～14h的条件下培养至无菌芽生长长度为1～1.5cm；