[发明专利]一种发根农杆菌K599介导的菊花转基因方法

权利要求书

1.一种发根农杆菌K599介导的菊花转基因方法，所述方法包括：

(1)将发根农杆菌K599菌液侵染菊花无菌苗叶片或叶腋，诱导形成转基因不定根；

(2)当转基因不定根生长到2cm以上后，从顶端剪取0.4～0.8cm长度的转基因不定根，转入继代培养基进行繁殖，每隔15～20天剪取长度0.4～0.8cm的转基因不定根顶端转入新的继代培养基，按此方法进行传代培养2～3代后再转入诱导培养基进行诱导培养，将诱导出的愈伤组织转入分化培养基进行分化培养，将分化出的苗转入生根培养基形成带根的完整植株；

所述继代培养基为添加500mg/L头孢霉素的MS培养基；

所述诱导培养基为添加0.5mg/L 6-苄氨基嘌呤+1mg/L萘乙酸的MS培养基；

所述分化培养基为添加2mg/L 6-苄氨基嘌呤的MS培养基；

所述生根培养基添加0.5mg/L生长素的MS培养基；

上述培养均在带盖培养瓶中进行；

(3)分化出的完整植株长至5～6cm时，打开培养瓶盖练苗3d后，再移栽到泥炭∶砻糠灰∶珍珠岩体积比3∶1∶1的土壤中，在自然条件下生长，获得转基因菊花。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中发根农杆菌K599为带有目的基因的发根农杆菌K599，由含有目的基因的质粒导入野生型发根农杆菌K599获得。